(一)靛基质试验
1．原理 又称吲哚试验。有些细菌具有色氨酸酶，能分解培养基中的色氨酸，生成吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。
2．方法 将待检菌接种至蛋白胨水培养基中，35℃孵育1～2 d，沿管壁慢慢加入靛基质试剂(主要成分为对二甲基氨基苯甲醛)2～3滴，立刻观察结果。两液面交界处呈红色者为阳性，无红色者为阴性(彩图5)。
3．应用 主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。
(二)脲酶试验
1．原理 某些细菌能产生脲酶，分解培养基中的尿素形成氨，培养基呈碱性，使酚红指示剂变红色。
2．方法 将待检菌接种于含尿素的培养基中，35℃孵育培养18～24 h观察结果。培养基呈红色者为脲酶试验阳性(彩图6)，未变色为阴性，阴性时应继续观察4 d。注意必须整管培养基均变红才可判断本试验结果为阳性。
3．应用 主要用于肠杆菌科细菌的鉴定，也可用于幽门螺杆菌的鉴定。
(三)氨基酸脱羧酶试验
1．原理 有些细菌能产生氨基酸脱羧酶，使该种氨基酸脱去羧基生成胺，从而使培养基变碱性，指示剂变色。常用的氨基酸有赖氨酸、鸟氨酸和精氨酸。
2．方法 挑取纯菌落接种于含鸟氨酸(或赖氨酸、精氨酸)的培养基及不含氨基酸的对照培养基中，加无菌石蜡油覆盖，35℃孵育1～4 d，每日观察结果。若指示剂为溴甲酚紫，试验管呈紫色为阳性，若显黄色为阴性。若对照管和测定管均呈现紫色，提示试验细菌可能为非发酵菌。
3．应用 主要用于肠杆菌科及假单胞菌属的鉴定。
(四)精氨酸双水解酶试验
1．原理 精氨酸经两次水解后，生成鸟氨酸、氨及二氧化碳。鸟氨酸又在鸟氨酸脱羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均为碱性物质，故可使培养基变碱性，指示剂变色。
2．方法 挑取纯菌落接种于含精氨酸的培养基及不含精氨酸的对照培养基中，做肠杆菌科的鉴定时可覆盖灭菌的液状石膜，做假单胞菌属的鉴定时则不能覆盖液状石蜡。37℃孵育1～4 d，每日观察结果。若指示剂为溴甲酚紫则变为紫色，若指示剂为酚红则变为红色。黄色为阴性，对照管应为黄色。
3．应用 主要用于肠杆菌科及假单胞菌属某些细菌的鉴定。
(五)苯丙氨酸脱氨酶试验
1．原理 有些细菌能产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基生成苯丙酮酸，与三氯化铁作用形成绿色化合物。
2．方法 将待检菌接种于苯丙氨酸培养基，35℃孵育18～24 h，滴加10%三氯化铁试剂，立即观察结果，在5 min内作出判断。呈绿色者为阳性，无色为阴性(彩图7)。
3．应用 主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌、普罗威登斯菌和摩根菌均为阳性，肠杆菌科其他细菌则为阴性。
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