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标本的留取与检测

时间:2022-07-01 百科知识 版权反馈
【摘要】:用1μm的石蜡切片,进行HE、PAS及PASM染色,光镜下观察肾脏病理改变。

1.尿蛋白定量测定 分别于实验前(即0周)、腹腔注射BSA后2、3、4周末采集24h尿液。将每只大鼠分别置于各代谢笼中24h,留尿前一夜至留尿结束期间禁食,自由饮水,记录24h尿量,用考马斯亮蓝法测得尿蛋白浓度,并计算24h尿蛋白总量。

2.血生化检测 各组于治疗结束时,乙醚轻麻,内眦取血,采用自动生化分析仪测定血清中总蛋白、白蛋白、胆固醇、三酰甘油、尿素氮、肌酐。

3.肾重指数测量 实验前及实验结束时用电子秤测量大鼠体重,实验结束杀鼠后立即取左肾称重量,肾重指数=左肾重量/体重。

4.肾脏组织标本的处理 各组大鼠于实验结束时,用10%水合氯醛(0.4ml/100g,ip)麻醉,自内眦取血后,仰卧位固定于术台上,腹正中切口3.0cm,取出左肾,并将取出的肾组织分为二部分,一部分留作制备冰冻切片用,OCT包埋、液氮冷冻后立即置于-70℃冰箱中保存;第二部分肾组织置于10%甲醛中固定,用于制备石蜡切片。用1μm的石蜡切片,进行HE、PAS及PASM染色,光镜下观察肾脏病理改变。

5.肾脏病理光镜观察 严重的弥漫性渗出性炎症病变,肾小球体积变大,肾小球内细胞数量增多,大量的中性粒细胞浸润,系膜基质弥漫性增生,肾小囊内有大量血浆蛋白漏出,肾小管扩张,有大量的蛋白管型形成,上皮细胞呈颗粒及空泡变性,间质灶状单核、淋巴细胞浸润(图5-1)。

图5-1 A.对照组光镜改变(×400);B.模型组光镜改变(×400)

6.免疫荧光观察 取-70℃冰箱中保存的OCT包埋的肾组织制作冰冻切片,以FITC标记的羊抗大鼠IgG及C3做直接荧光染色,荧光显微镜下观察结果(图5-2)。

图5-2 模型组及对照组大鼠肾组织免疫荧光变化(×400)

A.对照组IgG荧光;B.对照组C3荧光;C.模型组IgG荧光;D.模型组C3荧光

参考文献

[1]张五星,陈香美,魏日胞,等.慢性血清病肾炎模型的改进研究.中国比较医学杂志,2003,13:138-141.

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