痰液采取方法和质量直接影响痰检查的阳性率，痰脱落细胞检查结果与下面四个步骤有关：咳痰、涂片、染色、镜检。
（一）痰液留取的两个重要环节
1．痰液必须从肺部深处用力咳出。
2．标本要新鲜（不超过1～2 h），否则影响检查结果，首先向病人及家属讲明留痰的意义。
（1）合格痰液
①病人在门诊坐候30 min，用力从肺部深处咳出。
②若病人无咳嗽，可吸一口烟激发咳嗽。
③咳嗽声音低沉，咳出的痰液黏稠，可拉成细丝。
④5～6口痰液（3～5 ml）。
⑤吐在浸蜡盒内或塑料杯内。
⑥立即涂片。
（2）不合格痰液
①咳嗽声音短而响亮。
②咳出痰液呈水样、鼻涕样。
③咳在纸上的痰。
④陈旧痰。
（二）痰液外观
是直接观察痰液留取质量的标准，也是诊断肺癌的重要依据。因此，如何精选有效部分进行涂片是提高痰癌细胞检出率的第二个关键环节。
1．血丝痰 血丝痰常混在黏稠痰液中，提示因癌肿表面遭受损伤和坏死溃疡引起血管破裂所致，选择此部分涂片，诊断阳性率较高，为62.7%。
2．白色痰液 粗细如白色细线，呈螺旋状卷曲，牵引时可拉长，放后又缩短，此痰液诊断阳性率较高，为23.1%。
3．透明蛋清液 无色似蛋清，高度黏稠，可拉成细丝，诊断阳性率也较高，为11.6%。
4．粉色、咖啡色痰 表示红细胞溶解陈旧所致，诊断阳性率仅为1.95%。
5．泡沫痰液 痰液表面有大量泡沫，多伴有肺气肿、气管炎，应取泡沫下面的黏液部分检查，阳性率为0.9%。
6．鲜血痰液 提示良性癌变，多见于肺不张、肺结核、凝血机制障碍等，无一例阳性。
7．黄色脓痰 黄色或绿色脓样，由大量脓细胞、炎性细胞组成，提示化脓性炎症，无一例能查到癌细胞。
8．灰黑色冻痰 有大量吞噬灰尘的吞噬细胞——尘埃细胞。此时应重留。
9．水样痰 混入大量口水、涎液、鼻涕或痰存留时间长，液化，无一例阳性，应重新留取。
从以上可知，痰液的留取或精选有效痰液是痰脱落细胞检验诊断的关键。
（三）涂片
1．挑选阳性外观痰液，用竹签挑取有效部分放于3张玻璃片上，每张大约1 ml。
2．将痰液无效部分或多余痰液刮去，剩痰液0.2 ml左右，用竹签均匀慢慢像拉网似地涂抹，面积大小1.2 cm×3 cm，痰层厚1～2 mm。涂抹太厚细胞重叠，影响观察，涂抹太薄细胞过少，影响阳性率。
较薄涂片适合用瑞-姬双染色。
较厚涂片适合用HE染色。
3．痰脱落细胞检查，由于标本黏稠、厚，最好用HE染色。
（四）染色
1．遵循三项原则
（1）对标本黏稠、较厚的涂片，具有较强染色能力。
（2）染色新鲜，细胞结构清晰，癌细胞与非癌细胞经染色后，颜色有明显差异。
（3）方法简单、快速、易掌握，便于推广。
我们根据这三项原则，选择用HE染色。
2．HE染色的优点（改良快速）
（1）涂片较厚不干，可湿固定。
（2）对黏稠涂片，穿透力强，染色满意，诊断阳性率高；避免用瑞氏染色对较强嗜碱性细胞、癌细胞群染色不清，呈一片黑的 缺点。
（3）HE染色对鉴别癌细胞种类有帮助，如鳞癌偏酸性，腺癌嗜碱性，对未分化癌较瑞氏染色易鉴别。
（4）涂片厚，诊断阳性率高。
我们主张用改良HE染色代替瑞氏染色。
3．方法
（1）新鲜涂片用95%乙醇与乙醚等量混合，含少许冰醋酸固定液固定5～8 min。
（2）晾干或烘干，水洗（缸内）。
（3）烘干，苏木素染色7 min。
（4）取出，在1%盐酸乙醇缸内浸泡1～3次。
（5）晾干或烘干，用1%伊红染色1 min。
（6）在95%乙醇缸内浸泡数秒。
（7）晾干或烘干，镜检。
（五）检查
将涂片先在低倍镜下查找阳性背景或可疑细胞成分，再用油镜仔细观察其特点。
1．HE染色观察细胞要抓住核的三大特点 ①核增大；②核有畸形、角度；③核浓染（黑墨水似的）。
2．全显染色（瑞氏-姬姆萨混合）要抓住八个特点 ①细胞大小不等；②形态畸形怪异；③成团、成群相互拥挤重合，边缘不清；④核增大＞20μm，有畸形；⑤染色质浓密不均；⑥核分裂增多，异常核分裂；⑦核仁增大，增多；⑧胞浆少，偏碱性，有空泡。
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