粗脂肪的提取和测定

实验一　粗脂肪的提取和测定

【实验目的】

学习和掌握索氏提取器提取脂肪的原理和方法。

【实验原理】

索氏提取法的原理是将经前处理的样品用无水乙醚或石油醚回流提取，使样品中的脂肪进入溶剂中，蒸去溶剂后所得到的残留物即为脂肪(或粗脂肪)。由于索氏提取法提取的脂溶性物质为脂肪类物质的混合物，除含有脂肪外还含有磷脂、色素、树脂、固醇和芳香油等醚溶性物质。因此，用索氏提取法测得的脂肪也称为粗脂肪。此法适用于脂类含量较高、结合态的脂类含量较少、能烘干磨细，并且不易吸湿结块的样品中脂肪含量的测定。

食品中的游离脂肪一般都能直接被乙醚、石油醚等有机溶剂抽提，而结合态脂肪不能直接被乙醚、石油醚提取，需在一定条件下进行水解等处理，使之转变为游离脂肪后方能提取，故索氏提取法测得的只是游离态脂肪，而结合态脂肪测不出来。

索氏提取法是抽提脂肪的经典方法，对大多数样品结果比较可靠，但费时间，溶剂使用量大，且需专门的索氏抽提器(图2-1)。

索氏提取器由提取瓶、提取管、冷凝器三部分组成的，提取管两侧分别有虹吸管和连接管。各部分连接处要严密不能漏气。提取时，将待测样品包在脱脂滤纸内，放入提取管内。提取管内加入无水乙醚。加热提取瓶，无水乙醚气化，由连接管上升进入冷凝器，凝成液体滴入提取管内，浸提样品中的脂类物质。待提取管内的无水乙醚液面达到一定高度，溶有粗脂肪的无水乙醚经虹吸管流入提取瓶。流入提取瓶的无水乙醚继续被加热气化、上升、冷凝，滴入提取管内，如此循环往复，直到抽提完全为止。

图2-1索氏抽提器示意图1．浸提管2．通气管3．虹吸管4．小烧瓶5．冷凝管

【实验材料】

花生仁。

【实验器材】

索氏提取器(50 ml)、分析天平、烘箱、电加热板、脱脂滤纸、脱脂棉、镊子、烧杯等。

【药品试剂】

无水乙醚。

【实验方法】

1．样品处理:将干净的花生仁放在80～100℃烘箱中烘4小时。待冷却后，称取2 g，置于研钵中研磨细，将样品及擦净研钵的脱脂棉一并用脱脂滤纸包扎好，勿使样品漏出。

2．抽提:

(1)将洗净的索氏提取瓶在105℃烘箱内烘干至恒重，记录重量。

(2)将无水乙醚加到提取瓶内约为瓶容积的1/2～2/3。将样品包放入提取管内。把提取器各部分连接后，接口处不能漏气。用电热板加热回馏2～4小时。控制电热板的温度，每小时回馏3～5次为宜。直到用滤纸检验提取管中的乙醚液无油迹为止。

(3)提取完毕，取出滤纸包，再回馏一次，洗涤提取管。当提取管中的无水乙醚液面接近虹吸管口时，倒出无水乙醚。若提取瓶中仍有乙醚，继续蒸馏，直至提取瓶中无水乙醚完全蒸完。

(4)取下提取瓶，用吹风机在通风橱中将剩下的乙醚吹尽，再置入105℃烘箱中烘干、恒重，记录重量。

3．计算:按下式计算样品中粗脂肪的百分含量。

式中:

W₀——接收瓶重;

W——提取脂肪干燥后接收瓶重。

【注意事项】

1．乙醚易燃、易爆，应注意规范操作，加热时不能用明火。

2．待测样品若是液体，应将一定体积的样品滴在脱脂滤纸上，在60～80℃烘箱中烘干后，放入提取管内。

3．本法采用沸点低于60℃的有机溶剂，不能提取出样品中结合状态的脂类，故此法又称为游离脂类定量测定法。

4．待测样品若是液体，应将一定体积的样品滴在脱脂滤纸上在60～80℃烘箱中烘干后放入提取管内。

【思考题】

1．做好本实验应注意哪些事项?

2．索氏提取法为什么又称游离脂肪酸定量测定法?

【附录】

1．酸水解法提取粗脂肪:样品经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得游离及结合脂肪总量。

(1)精密称取2 g固体样品，置于50 ml大试管内，加8 ml水，混匀后再加10 ml盐酸(或者称取10 g液体样品，置于50 ml大试管内，加10 ml盐酸)。

(2)将试管放入70～80℃水浴中，每隔5～10分钟用玻璃棒搅拌一次，至样品消化完全为止(40～50分钟)。

(3)取出试管，加入10 ml乙醇，混合。冷却后将混合物移于100 ml带盖的量筒中，以25 ml乙醚分次洗试管，一并倒入量筒中。待乙醚全部倒入量筒后，加塞振摇1分钟，小心开塞，放出气体，再塞好，静置12分钟。小心开塞，并用石油醚-乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪。

(4)静置10～20分钟，待上部液体清晰，吸出上清液于已恒量的锥形瓶内，再加5 ml乙醚于带有盖子的量筒内，振摇，静置后，仍将上层乙醚吸出，放入原锥形瓶内。将锥形瓶置水浴上蒸干，置95～105℃烘箱中干燥2小时，取出放干燥器内冷却0．5小时后称量。

2．罗紫-哥特里法:

(1)取一定量样品(牛奶吸取10 ml;乳粉精密称取1 g，用10 ml 60℃水分数次溶解)于抽脂瓶中。

(2)加入1．25 ml氨水，充分混匀，置60℃水浴中加热5分钟，再振摇2分钟。

(3)加入10 ml乙醇，充分摇匀，于冷水中冷却。

(4)加入25 ml乙醚，振摇半分钟。

(5)加入25 ml石油醚，再振摇0．5分钟，静置30分钟。

(6)待上层液澄清时，读取醚层体积，放出一定体积醚层于一已恒重的烧瓶中，蒸馏回收乙醚和石油醚，挥干残余醚后，放入100～105℃烘箱中干燥1．5小时，取出放入干燥器中冷却至室温后称重，重复操作直至恒重。

式中:

m₂——烧瓶和脂肪质量(g);

m₁——空烧瓶的质量(g);

m——样品的质量(g或ml数×相对密度);

V——读取醚层总体积(ml);

V₁——放出醚层体积(ml)。