血浆因子Ⅷ

【原理】　受检血浆、稀释的正常血浆分别同缺乏因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的基质血浆、白陶土磷脂悬液和Ca2＋溶液混合，记录开始出现纤维蛋白丝所需的时间。将受检者血浆测定的结果同正常血浆做比较，分别计算出受检血浆中因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性（FⅧ：C、FⅨ：C、FⅪ：C和FⅫ：C）相当于正常人的百分率。下面为FⅧ：C活性测定方法，FⅨ：C、FⅪ：C和FⅫ：C活性测定方法与FⅧ：C相同。

【试剂】

1.缺乏因子Ⅷ C的基质血浆先天性或人工制备的缺乏因子Ⅷ：C的血浆，它的活性要低于1%，即为基质血浆。冻干低温（-40℃～-80℃）保存。

2.脑磷脂溶液 用兔脑或人脑的部分凝血活酶，用前以生理盐水作1:100稀释。

3.5g/L白陶土生理盐水悬液

4.0.05mol/L氯化钙溶液

5.咪唑缓冲液（pH 7.3）

甲液：取咪唑1.36g，氯化钠2.34g溶于200ml蒸馏水中，再加0.1mol/L HCl 74.4ml，最后加蒸馏水至400ml。

乙液：38g/L枸橼酸钠溶液。

工作液：5份甲液加1份乙液混合而成。

【标准曲线绘制】　取20名正常人新鲜混合血浆，用咪唑工作液做1:10，1:20，1:40，1:80，1:160稀释。将各稀释度样品分别与乏因子Ⅷ：C基质血浆，脑磷脂悬液及5g/L白陶土生理盐水悬液各0.1ml，混匀置37℃水浴中预温2min，再加0.05mol/L氯化钙溶液0.1ml立即计时，由此所得凝固时间的对数和浓度的对数计算回归方程（以1:10作为100%），或以稀释度为横坐标，凝固时间作为纵坐标，在双对数曲线纸上绘制曲线。

【操作方法】

1.空白管测定 取基质血浆、脑磷脂悬液、咪唑工作液和5g/L白陶土生理盐水悬液各0.1ml混匀，测定方法同上。要求空白管时间在240～250s。凝固时间长短可用脑磷脂溶液的浓度来调节。

2.被检标本的测定 取被检者全血以38g/L枸橼酸钠做9:1抗凝，立即以3 000r/min离心10min。分离血浆并置于冰浴中，然后以咪唑工作液将被检者血浆做1:20稀释，测定方法同上。将测定凝固时间代入回归方程或从标准曲线上查出Ⅷ:C值，将结果乘以2。若凝固时间过长，应减少稀释倍数，以使凝固时间处于线性的范围内。

【参考值】　FⅧ：C为103%±25.7%；FⅨ：C为98.1%±30.4%；

　　　　　　FⅪ：C为100%±18.4%；FⅫ：C为92.4%±20.7%。

【临床意义】

1.血浆因子Ⅷ：C C、Ⅸ：C、Ⅺ：C和Ⅻ：C水平升高主要见于血栓前状态和血栓形成性疾病，如肺栓塞、妊娠高血压综合征、晚期妊娠、口服避孕药、肾病综合征及恶性肿瘤等。

2.血浆因子Ⅷ：C C、Ⅸ：C、Ⅺ：C和Ⅻ：C水平减低因子Ⅷ：C减低常见于血友病A、DIC、血管性血友病、抗Ⅷ：C抗体所致获得性血友病。因子Ⅸ：C减低常见于血友病B、维生素K缺乏症、DIC、肝脏病、口服抗凝药物等。因子Ⅺ：C减低常见于因子Ⅸ缺乏症、DIC、肝脏疾病等。因子Ⅻ：C减低见于先天性因子Ⅻ缺乏症、DIC、肝脏疾病、某些血栓性疾病等。

【注意事项】

1.乏因子Ⅷ：C的基质血浆Ⅶ：C水平应＜1%，而其他因子水平必须正常。

2.被检标本要立即测定，若不测定应立即分离置-20℃～-40℃冰箱中保存备检。

3.正常标准血浆要求20人以上混合血浆，分装冻干保存于低温冰箱内，可用2～3个月。

4.每次测定都应作标准曲线，并注意实验条件及操作对实验结果的影响。