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荧光斑点试验

时间:2022-06-30 百科知识 版权反馈
【摘要】: 葡萄糖6-磷酸脱氢酶荧光斑点试验受检血中G6PD活性正常,则能将反应液中的辅酶Ⅱ转变为还原型辅酶Ⅱ,后者在紫外光激发下发生荧光。G6PD活性越强,荧光越强,G6PD缺乏时,不出现荧光。37℃水浴10min后再取一滴血滴于滤纸上。晾干后,在紫外光源下观察有无荧光产生。

【原理】 葡萄糖6-磷酸脱氢酶荧光斑点试验(G6PD fluorescent spot test)受检血中G6PD活性正常,则能将反应液中的辅酶Ⅱ(NADP)转变为还原型辅酶Ⅱ(NADPH),后者在紫外光激发下发生荧光。G6PD活性越强,荧光越强,G6PD缺乏时,不出现荧光。

试剂

1.0.01mol/L葡萄糖-6-磷酸液(G6P) 称取G6P钠盐3.05mg溶于1ml蒸馏水中。

2.0.0075mol/L NADP液 称取NADP 6mg溶于1ml蒸馏水中。

3.1%皂素。

4.0.25mol/L磷酸盐缓冲液 称取KH2PO434.02g,Na2HPO435.49g,分别配成1 000ml,然后取KH2PO4液10.2ml,Na2HPO4液80.8ml混合。

5.反应液 G6P液0.1ml,NADP液0.1ml,皂素0.2ml,磷酸盐缓冲液0.3ml,蒸馏水0.3ml,混匀。

【操作方法】 肝素抗凝全血0.01ml,加入反应液0.1ml,滴于滤纸上(第1斑点)。37℃水浴10min后再取一滴血滴于滤纸上(第2斑点)。晾干后,在紫外光源下观察有无荧光产生。

【参考值】 正常人滤纸上有很强的荧光斑点。

【临床意义】 G6PD缺乏患者荧光很弱或无荧光,杂合子或某些G6PD变异体则可能有轻度荧光。

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