【摘要】：溶酶体是由一层单位膜包围，内含多种酸性水解酶的泡状结构。此外，溶酶体与器官形成、激素分泌的调节以及某些疾病的发生密切相关。1．制备蔗糖梯度溶液：取带有两个小杯的梯度混合器，两个小杯分别装入117ml 2．1mol/L蔗糖和13ml 1．1mol/L蔗糖。5．将2ml悬浮的半纯化的溶酶体铺在蔗糖梯度上面，用玻璃棒搅动最上层的梯度，使梯度和溶酶体之间的界面破坏，然后100 000g×150min离心，离心结果可见：梯度溶液分3条明显的带和较少的沉淀。
第四节 溶酶体的分离
溶酶体是由一层单位膜包围，内含多种酸性水解酶的泡状结构。溶酶体含有40多种水解酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等，其主要功能是对细胞内物质的消化作用。此外，溶酶体与器官形成、激素分泌的调节以及某些疾病的发生密切相关。可采用如下方法分离获得。
1．制备蔗糖梯度溶液：取带有两个小杯的梯度混合器，两个小杯分别装入117ml 2．1mol/L蔗糖和13ml 1．1mol/L蔗糖。
2．将大鼠处死取出肾脏，以1∶8（重量/体积）比例加入0．3mol/L蔗糖，然后在玻璃匀浆器中匀浆肾脏组织。
3．以150g×10min离心，弃沉淀，取上清液，9 000g×3min离心，弃上清液，取沉淀。
4．沉淀从上至下依次为白色、黄褐色、暗褐色3种不同颜色层，上层为膜成分的混合物，中层为线粒体部分，最底层则为半纯化的溶酶体。先用吸管小心吸掉上层，然后沿管壁加入数毫升0．3mol/L蔗糖液，慢慢摇管，使界面层悬浮起来后弃之。用0．3mol/L蔗糖液洗涤1次，底层溶酶体部分悬浮在2．5ml 0．3mol/L蔗糖液中。
5．将2ml悬浮的半纯化的溶酶体铺在蔗糖梯度上面，用玻璃棒搅动最上层的梯度，使梯度和溶酶体之间的界面破坏，然后100 000g×150min离心，离心结果可见：梯度溶液分3条明显的带和较少的沉淀。最下层的暗黄色到褐色的带即为纯化的溶酶体。以上所有操作需在0～4℃下进行。
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