细菌的接种与分离培养

三、细菌的接种与分离培养

在进行细菌的接种与培养时，根据标本来源、检测目的及培养基特性，采用不同的接种方法　。

1．平板划线法将含有多种细菌的标本，经过划线接种到固体培养基培养后获得单个菌落的方法　称为分离培养。将分离培养获得的单个菌落转种至另一个培养基获得纯种细菌的方法　称为纯培养(pure culture)。分离培养是细菌培养鉴定的重要步骤，只有成功分离出待检菌纯培养物，才能进一步进行鉴定。平板划线法分为连续划线法和分区划线法。

(1)连续划线法:用于含菌量不多的标本的分离培养。用接种环或无菌棉拭子取标本涂布于培养基一端，由此开始连续、密集、不重复划线接种，涂满整个培养基(图3－4)。

(2)分区划线法:用于含菌量多的标本，如粪便、脓汁标本等。将培养基分为3～4区，1区最小，用接种环取适量标本均匀涂布于1区，接种环灭菌后划线于2区，2区划线起始与1区交叉3～4次后不再交叉，各线之间保持一定距离且不可交叉重复，相同方法　划线于3区、4区，至分离出单个细菌(图3－5)。

图3－4　细菌连续划线接种

图3－5　细菌分区划线接种

2．斜面接种法用于纯种培养、保存菌种及某些生化鉴定。用接种环/接种针灭菌后挑取单个菌落从斜面底部向上划一条直线，再从底部向上或直接从底部均匀密集曲线划线接种。生化鉴定培养斜面接种时用接种针挑取菌落后插入斜面正中垂直刺入底部，抽出后用以上方法　接种(图3－6)。

3．穿刺接种法用于半固体培养基、明胶及双糖管的接种。用灭菌后接种针挑取菌落后垂直刺入培养基中央至约管底0．4 cm处，再沿原路退出(图3－7)。

4．液体培养基接种法用于肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等液体培养基的接种。用灭菌后接种环挑取菌落，倾斜液体培养管，在液面与管壁交界处研磨，使细菌均匀分布于培养液(图3－8)。

图3－6　斜面培养基接种

图3－7　半固体培养基接种

图3－8　液体培养基接种

5．倾注平板法用于兼性厌氧菌或厌氧菌的稀释定量培养和饮水、饮料、牛乳和尿液等标本的活菌计数。取1 mL菌液加入无菌平板中，倒入融化并冷却至45～50℃的琼脂15～20 mL，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，待凝固后置37℃培养箱培养至长出菌落后即可计数。

6．涂布接种法用于纸片法药物敏感性试验。将适量菌液加入到琼脂培养基表面，用灭菌的棉拭子或L型玻璃棒从不同角度将菌液反复涂布于琼脂表面，然后贴上药敏纸片或直接培养。