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检查方法及灌洗细胞计数分类

时间:2022-04-26 理论教育 版权反馈
【摘要】:BAL在纤维支气管镜检查时进行。2.BAL的灌洗部位,除可直接灌洗有病变的肺叶外,通常多在中叶或舌段进行,因这两个部位纤支镜比较容易嵌入,回收液量和细胞数比下叶多20%左右。对大多数弥漫性肺疾病,在一个部位回收的BALF就可以获得足够的临床资料,通常可以代表全肺。但对于局限性病变如炎症浸润、恶性肿瘤,应选择有病变的肺叶进行BAL。8.将BALF离心、使上清液与细胞分离后,上清液进行可溶性成分分析。

BAL在纤维支气管镜检查时进行。在要进行灌洗的叶(段)支气管注入2%Lidocain 1ml局部麻醉后,将纤支镜前端嵌入段或亚段支气管开口。经纤支镜吸引管推注或滴注静脉注射用生理盐水至肺段或肺亚段,每次注入后随即负压吸引。BAL灌洗部位通常在右中叶或左舌叶,其他肺叶也可以进行。灌洗液一般为37℃,室温下(25℃左右)的生理盐水亦可应用。每次注入25~50ml,总量100~250ml,不应超过300ml。负压吸引的压力约为3.33~13.3kPa(25~100mmHg)。要防止负压过大、过猛。中叶或舌叶灌洗,回收量应达到40%以上,下叶或其他肺叶为30%以上。回收的灌洗液(BALF);置于内壁涂硅油的容器(或可防止巨噬细胞贴壁的其他容器)中,容器周围宜用冰(-4℃)包围,半小时内送至实验室,通常在2小时内处理。

BALF细胞计数和分类技术:回收的BALF作计量后,取少量标本置于白细胞计算盘进行细胞计数。在高倍显微镜下计数除上皮细胞及红细胞外的所有细胞(巨噬细胞、淋巴细胞、粒细胞等)。以每毫升回收液的细胞数和回收液的总细胞数表示。细胞分类涂片的制作可用细胞离心器(cytospin)进行。也可用试管离心后分离的细胞涂片制作;此外还可用微孔纤维滤膜制作。Cytospin制作涂片需要特殊设备,每次可同时制作多张涂片,效率高,所获得的细胞涂片规范,细胞分布均匀,但对淋巴细胞比例高的标本要丢失一部分淋巴细胞。试管离心法制作的细胞涂片比较简便易行,但不够规范,需要有一定的经验。所制成的细胞涂片用Wright-Giemsa(或Wright或MGG)染色,在油镜下至少计数200个细胞作细胞分类。

BAL及BALF的细胞计数和分类方法国内外基本一致,但有些问题可作进一步讨论。

1.BAL主要是应用纤维支气管镜进行支气管肺泡灌洗、获取肺泡表面衬液进行炎症与免疫细胞以及可溶性物质检查的一种方法,它与应用少量液体注入支气管进行冲洗(支气管冲洗)以及灌注大量液体进行治疗的支气管肺泡灌洗不同。

2.BAL的灌洗部位,除可直接灌洗有病变的肺叶外,通常多在中叶或舌段进行,因这两个部位纤支镜比较容易嵌入,回收液量和细胞数比下叶多20%左右。对大多数弥漫性肺疾病,在一个部位回收的BALF就可以获得足够的临床资料,通常可以代表全肺。但对于局限性病变如炎症浸润、恶性肿瘤,应选择有病变的肺叶进行BAL。

3.BAL所灌注的液体必须是静脉注射用生理盐水,即无致热原盐溶液,温度最好在37℃,因该温度条件下的盐水很少引起咳嗽、支气管痉挛和肺功能障碍。室温下的液体也可应用。

4.分次注入的灌洗液每次回收后可混合一起进行细胞计数和分类。第1份回收的标本往往混有支气管内成分,为防止混有支气管内成分,也可将第1份标本与以后收集的标本分开进行检查。

5.合适的BALF应为:①达到规定的回收量比例;②不混有血液,一般红细胞数不应超过10%;③不应混有多量的上皮细胞,一般不超过3%。

6.BAL细胞计数和分类方法,文献中有用Hanks液将离心沉淀的细胞洗后再作计数、分类涂片,这样细胞比较清晰、易数;但也会使一部分细胞在操作过程中丢失。

7.BALF中细胞总数、分类计数的正常范围各家报道有差别,现将正常非吸烟者BALF的细胞计数、细胞分类、淋巴细胞表面抗原表型结果列表如下(表10-1,2)。

8.将BALF离心、使上清液与细胞分离后,上清液进行可溶性成分分析。它们有以上来源:①被动漏出(如白蛋白、血清类黏蛋白);②主动转运(如IgA、IgM);③局部产生(分泌成分)。上清液检测的可溶性物质具体见表10-3。通常将分离得的上清液贮存在-20℃冰箱备用,若贮存时间在3个月以上,则应放在-70℃冰箱内。

表10-1 正常非吸烟者BALF细胞

Mac=巨噬细胞,Lym=淋巴细胞,Neut=中性粒细胞,Eos=嗜酸细胞

表10-2 正常非吸烟者BALF中淋巴细胞表面抗原表型

表10-3 BALF中监测的可溶性物质

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