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特异性探针

时间:2022-03-13 理论教育 版权反馈
【摘要】:这类探针的用途与β-卫星DNA探针相似。2.位点特异性探针 这类探针一般呈单拷贝,有区域特异性,长度为15~500kb。主要用于染色体DNA克隆序列的定位和靶DNA序列拷贝数及结构变化的检测。该技术具有严格的染色体特异性,可广泛用于遗传病和肿瘤的检测。这些载体上所携带的DNA经荧光标记即可形成探针。

1.序列重复探针

(1)α-卫星DNA探针:这类探针序列位于染色体的着丝粒处,且序列高度重复,易产生非特异结合。因此,要取得较好的特异性,必须进行严格的杂交后清洗。α-卫星DNA探针主要用于染色体数目的检测和标记染色体来源的鉴定,亦可用于间期细胞中染色体的大规模筛选。

(2)β-卫星DNA探针:β-卫星DNA位于顶端着丝粒染色体及9号染色体的异染色质周围。这类探针除可用于染色体数目的检测外,还可用于检测端粒部位的重复序列。

(3)经典卫星探针:经典卫星DNA有AATTGG短片段重复,位于染色体1、9、15、16和Y染色体长臂的异染色质周围。这类探针的用途与β-卫星DNA探针相似。

2.位点特异性探针 这类探针一般呈单拷贝,有区域特异性,长度为15~500kb。主要用于染色体DNA克隆序列的定位和靶DNA序列拷贝数及结构变化的检测。可用于特定的遗传病的诊断及染色体微缺失综合征的诊断,如Prader-Willi综合征、DiGeorge综合征等。

3.全染色体涂染探针 这类探针是针对某一整条染色体设计的探针,涂染探针主要用于常规显带技术无法确定的染色体重排和标记染色体的确定。利用涂染探针研究复杂染色体畸变可节省时间,结果容易判读。该技术具有严格的染色体特异性,可广泛用于遗传病和肿瘤的检测。但整条染色体涂染探针不能分辨同一染色体臂间易位及染色体倒位。

4.DNA单一序列探针 这类探针包括各种人工染色体探针,如YAC(酵母人造染色体)、PAC(噬菌体人造染色体)、BAC(细菌人造染色体)等。人工染色体是一种人为设计出的游离于宿主细胞染色体外的人工载体。这类载体大多具备染色体的最简单结构,如带有着丝粒及染色体端粒,同时还带有复制起点和筛选标记物。人工载体可以稳定地存在于细胞中,并能均等地传递给子代细胞。这类人工载体可携带较大的DNA片段,对这些DNA进行荧光标记就形成了探针。

5.其他载体携带的小片段DNA探针 能携带小片段DNA的载体包括黏粒、λ噬菌体及质粒等。这些载体上所携带的DNA经荧光标记即可形成探针。

(刘燕青)

参考文献

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