探针的检测

(一)放射性同位素探针的检测

放射性同位素探针的检测采用放射自显影或计数的方法。放射性自显影方法是将杂交膜与X线片在暗盒中曝光数小时至数天(视放射性强弱而定)，再显影、定影即可。为了减弱32P的辐射，曝光通常在-20℃或-80℃下进行。液闪计数法是将杂交后的膜漂洗后剪成小块，经真空干燥后装入闪烁瓶，加入2～5ml闪烁液，同时还需用相同大小的无样品膜作为本底对照，最后用液体闪烁计数器自动计数。该法主要用于点和狭缝杂交以及比较两个杂交信号强弱等情况。

(二)非放射性探针的检测

非放射性探针的标记物不同，其检测方法也不同。除酶直接标记的探针外，其他非放射性标记探针的显示需进行两步法。

1.显色反应

(1)酶促显色法：常用的免疫酶学检测方法有两类：①碱性磷酸酶显色体系：以BCIP/NBT(5-溴-4-氯-3吲哚磷酸/硝基四氮唑蓝)为底物，反应产物为蓝紫色沉淀。②辣根过氧化物酶显色体系：以DAB(四氢氯化二氨基联苯胺)/H2O2为底物，反应产物为棕色；或以4-氯-1-萘酚/H2O2为底物，反应产物为蓝色。两种显色体系相比较而言，碱性磷酸酶显色体系的灵敏度和分辨率比辣根过氧化物酶显色体系高10倍左右，而辣根过氧化物酶显色体系更价廉、稳定。

(2)荧光法：不同的荧光素在激光照射下能发出不同颜色的荧光，用荧光显微镜或荧光检测系统进行荧光信号检测。

(3)化学发光法：化学发光指在化学反应过程中伴随有发光反应，从而对光信号进行检测。

2.偶联反应　探针与检测体系发生偶联反应，生成能与显色系统发生作用的中间产物，大多数非放射标记物是半抗原，通过抗原-抗体与显色体系相偶联。根据偶联反应的不同，可分为直接法、间接法、直接亲和法、间接亲和法及间接免疫-亲和法。

总之，探针标记和检测的方法很多，各有特点和适应范围，因而在使用过程中必须根据实验要求、标记方法的难易程度和检测手段等因素进行综合考虑。