植物毒素的测定

植物性食品中游离棉酚的测定(GB/T5009.148—2003)液相色谱法，适用于植物油或以棉籽饼为原料的其他食品中游离棉酚的测定。本方法检出限为5 ng，最低检出浓度为2.5mg/kg。

1.原理

植物油中的游离棉酚经无水乙醇提取，经C18柱将棉酚与试样中杂质分开，在波长235 nm处测定。水溶性试样中的游离棉酚经无水乙醇提取，浓缩至干，再加入乙醇溶解，用C18柱将棉酚与试样中杂质分开，在235nm处测定。根据色谱峰的保留时间定性，外标法峰高定量。

2.试剂

磷酸、无水乙醇、无水乙醚、普通氮气、甲醇(经0.5μm滤膜过滤)。

棉酚标准储备液: 精密称取0.1000g棉酚纯品，用无水乙醚溶解，并定容至100m L。此溶液相当于每毫升含棉酚1.0mg。

棉酚应用液: 取1mg/m L棉酚储备掖5.0m L于100m L容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，此溶液相当于每毫升含棉酚50mg。

磷酸溶液: 取300m L水，加6.0m L磷酸，混匀，经0.5μm滤膜过滤。

3.仪器

液相色谱仪(带紫外检测器); K-D浓缩仪; 离心机: 3000r/min; 10μL微量注射器;Micropark-C18(250mm，φ6mm)不锈钢色谱柱。

4.分析步骤

1)色谱条件

柱温40℃; 流动相，甲醇-磷酸溶液(85+15); 测定波长235nm; 流量l.0m L/min; 纸速0.25mm/min; 衰减: 1; 灵敏度: 0.02AUFS; 进样10μL。

2)试料制备

(1)植物油

取油样1.000g，加入5m L无水乙醇，剧烈振摇2min，静置分层(或冰箱过夜)，取上清液过滤，离心，上清液即为试料，10μL进液相色谱。

(2)水溶性试样

吸取试样10.0m L于离心试管中，加入10m L无水乙醚，振摇2min，静置5min，取上层乙醚层5m L，用氮气吹干，用1.0m L无水乙醇定容，过滤膜，即为试料，取10μL进液相色谱仪。

3)测定

(1)标准曲线制备

准确吸取1.00m L，2.00m L，5.00m L，8.00m L的50μg/m L的棉酚标准液于10.0m L容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，此溶液相应于5 μg/m L，10 μg/m L，25 μg/m L， 40μg/m L的标准系列，进样10μL，作标准系列，根据响应值绘制标准曲线。

(2)色谱分析

取10μL试样溶液注入液相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高，根据保留时间确定游离酚，根据峰高，从标准曲线上查出游离棉酚含量。

5.结果计算

式中: X——试样中棉酚的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);

m——试样的质量，单位为克(g);

A——测定试料中棉酚的含量，单位为微克每毫升(μg/m L)。

6.精密度说明

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。