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样品的测定

时间:2022-04-24 理论教育 版权反馈
【摘要】:方法:取标准抗原,用无放射活性的空白血清或血浆稀释成5~8个系列浓度,并加入等量的抗体和标记抗原,以上在适当条件下温育,待反应平衡后测定总计数率。加入分离剂,使结合部分与游离部分分离后测定各管结合部分或者游离部分的计数率。在坐标上,曲线的斜率最大的部分是放射免疫测定的工作范围。测血清药品浓度时,只要测出标记药物与抗体复合物的放射性,算出结合率,就可以从标准曲线上查出未知抗原的含量。

1.放射性强度的测定

B和F分离后,即可用测量仪器测量放射性强度。常见的测量仪器有两大类,液体闪烁计数仪和晶体闪烁计数仪。计数单位是探测器输出的电脉冲数,单位为cpm(计数/分)或者cps(计数/秒)。

2.标准曲线的绘制

方法:取标准抗原,用无放射活性的空白血清或血浆稀释成5~8个系列浓度,并加入等量的抗体和标记抗原,以上在适当条件下温育,待反应平衡后测定总计数率(T)。加入分离剂,使结合部分(B)与游离部分(F)分离后测定各管结合部分或者游离部分的计数率。标准曲线通常以标准抗原的浓度为横坐标,以结合率(B%)为纵坐标作图。纵坐标B%的计算有两种方法:一种是将与抗体结合的标记药物的放射性强度(B)与加入的标记药物总放射性强度(T)比较,即B%=(B/T)×100%;另一种是用零标准管(不加标准抗原)的放射性强度B0代替T比较,即B%(=B/B0)×100%。

一般来说剂量反应曲线的形状一般有3种:曲线形、直线形和反S形线。在坐标上,曲线的斜率最大的部分是放射免疫测定的工作范围。斜率越大,敏感性越高,测定范围小;斜率越小,工作范围大,而敏感性就较差。

测血清药品浓度时,只要测出标记药物与抗体复合物的放射性,算出结合率,就可以从标准曲线上查出未知抗原的含量。

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