用毛细管区带电泳法测定碳酸饮料中的防腐剂

一、 实验目的

（1） 通过本实验了解食品中防腐剂的种类及HPLC的操作技术。

（2） 掌握用最小二乘法处理分析数据的方法， 并对食品中的防腐剂进行定量测定。

二、 实验原理

为了防止食品在贮藏过程中发霉、 变质， 人们经常在食品中添加少量防腐剂来延长食品的保存、 保质期， 但防腐剂使用的品种及数量在食品卫生标准中有严格规定， 一般为1／1000～2／1000。 苯甲酸和山梨酸以及它们的钠盐、 钾盐是食品卫生标准允许使用的两种主要防腐剂。 这些防腐剂常用的测定方法有薄层色谱法、 气相色谱法、 液相色谱法、 紫外光谱法等， 但这些方法的前处理比较烦琐、 费力费时且分离效率不高。 毛细管区带电泳法只需用微孔滤膜过滤即可， 分离效率很高， 理论塔板数可达几十万。

三、 仪器与试剂

1. 仪器

（1） 毛细管区带电泳仪；

（2） 容量瓶；

（3） 微量进样器。

2. 试剂

（1） 缓冲溶液：用去离子水配制10mmol·L-1的硼砂和10mmol·L-1的十二烷基磺酸钠（SDS）各100m L， 等体积混合；

（2） 1000mg·L-1山梨酸标准溶液：称取0.1000g山梨酸，用100m L容量瓶定容；

（3） 未知样品。

四、 实验步骤

1. 色谱条件

（1） 毛细管柱：50μmi.d. ×40／47cm石英毛细管；

（2） 分离电压：20k V（正极进样， 负极检测）；

（3） 分离时间：20min；

（4） 进样时间：30s（压差进样）；

（5） 进样高度：10cm；

（6） 检测器： 紫外254nm。

2. 溶液的配制

取1000mg·L-1山梨酸标准溶液分别稀释成20mg·L-1、40mg·L-1、60mg·L-1、80mg·L-1、100mg·L-1的山梨酸标准溶液。

3. 标准工作曲线的绘制

采用液体压差进样， 分别测定上述5种溶液， 每一试样测定2～3次， 取其平均值， 根据峰面积做出标准工作曲线， 用最小二乘法计算出线性方程式及相关系数。

4. 食品中防腐剂含量的测定

按与标样相同的条件测定， 并根据工作曲线求出待测食品中山梨酸的质量浓度。

五、 数据处理

（1） 绘制山梨醇标准工作曲线： 浓度对峰面积做图。

（2） 计算未知样品的质量浓度。

思 考 题

讨论电压、 进样时间、 缓冲溶液的p H值以及环境温度对分离效果的影响。