血清无机磷定量

【实验目的】

1．掌握血清磷测定的原理和方法。

2．了解血清磷测定的临床意义。

【实验原理】

血清中无机磷即指以无机磷酸盐形式存在的磷。磷酸与钼酸形成磷钼酸，磷钼酸被还原剂（本法用Fe2＋）还原生成钼兰，钼兰为低价钼的化合物，溶液呈蓝色。

12H2MoO4＋H3PO4→H3PO4·12MoO3＋12H2O

H3PO4·12MoO3＋Fe2＋→还原MoO＋钼兰

此蓝色深浅与无机磷含量成正比。血清除蛋白滤液与磷标准液同样处理呈色，进行比色定量。

【实验器材】

分光光度计；离心机；吸量管、试管、离心管；血清。

【实验试剂】

1．12%三氯醋酸液　称取CCl3COOH　12g加水100ml溶成。用于血清除蛋白。

2．11．5%三氯醋酸液　CCl3COOH　11．5g加水100ml溶成。空白及标准稀释液用。

3．磷标准液

（1）储存液：称取纯KH2PO40．5853g加水溶成1L，放冰箱中保存。此液3ml中含磷0．4mg。

（2）应用液：取上述贮存液2．0ml，用11．5%三氯醋酸液准确稀释成100ml。此液3ml中含磷8μg。

4．硫酸亚铁钼酸铵液　（NH4）H2MoO4＋H2SO4→H2MoO4＋（NH4）2SO4

（1）10%钼酸铵10N硫酸液：先配制10N硫酸液，向约600ml水中慢慢加入浓硫酸278ml边加边摇匀，冷后加水至1L，混匀。

称取（NH4）6Mo7O24·4H2O　50g，放大烧杯中，边摇边加10NH2SO4液约400ml，完全溶解后移入500ml容量瓶中，并用10NH2SO4液冲洗烧杯，使全部移入容量瓶中，加10N H2SO4液至刻度线，混匀。

（2）硫酸亚铁钼酸铵液：要在临用前新配。移取上液10．0ml放入100ml干净的容量瓶中，加水约70ml，混匀。加入FeSO4·5H2O粉末5g，加水到刻度线，振摇使结晶完全溶解并混匀，必要时过滤。放棕色瓶中储存备用。

【实验方法】

1．于离心管中加12%三氯醋酸液3．8ml，加血清0．2ml，充分混匀，离心（2　000rpm，10min）。分离沉淀，收集上清。

2．取3只试管，做好记号，按附表19操作：

附表19　血清无机磷测定加样表

混匀，约10min后进行比色。用650nm或红色滤光板以空白管调零，读取标准管及待测管光吸收值（As、Au）。

3．计算：

血清无机磷（mg%）＝Au／As×0．008×100／（0．2×3／4）＝Au／As×16／3

【注意事项】

1．本法操作简便，呈色稳定，在室温下数分钟即可达最大呈色，数小时后基本不变。本法也可以用于测定尿、脑脊髓液中无机磷或血清磷酸酶等。

2．钼兰的显色深浅与溶液酸性有关，本试验中无论空白、标准和待测样品，都要使它们与三氯醋酸的终浓度相等。

【临床意义】

正常参考值：成人为3～5mg／dl（1．7～2．9mEq／L），儿童为4．5～6．5mg／dl。

1．血清无机磷增高　见于甲状旁腺功能减退、肾功能不全，摄取过量维生素D或多发性骨髓瘤、骨折愈合期等。

2．血清无机磷降低　见于甲状旁腺功能亢进、佝偻病、骨质软化症、糖尿病或大量葡萄糖静脉注入等。

（石少慧）