首页 理论教育 血清磷测定(钼蓝比色法)

血清磷测定(钼蓝比色法)

时间:2022-05-13 理论教育 版权反馈
【摘要】:血清中无机磷即指以无机磷酸盐形式存在的磷。磷酸与钼酸形成磷钼酸,磷钼酸被还原剂还原生成钼蓝,钼蓝为低价钼的化合物,溶液呈蓝色。此蓝色深浅与无机磷量成正比。血清除蛋白滤液与磷标准液同样处理呈色,进行比色定量。移取上液10.0ml放入100ml干净的容量瓶中,加水约70ml,混匀。1.于试管或离心管中加12%三氯醋酸液3.8ml,加血清0.2ml,充分混匀,过滤或离心。3.各加硫酸亚铁钼酸铵溶液2ml,混匀,约10min后进行比色。

实验十九 血清磷测定(钼蓝比色法

一、实验目的与要求

1.了解血清磷在人体营养学上的意义及其在生理学上的重要性。

2.掌握血清磷测定的原理和方法。

二、实验原理

血清中无机磷即指以无机磷酸盐形式存在的磷。磷酸与钼酸形成磷钼酸,磷钼酸被还原剂(本法用Fe2+)还原生成钼蓝,钼蓝为低价钼的化合物,溶液呈蓝色。此蓝色深浅与无机磷量成正比。血清除蛋白滤液与磷标准液同样处理呈色,进行比色定量。

img70

三、实验仪器与试剂

1.仪器

(1)722分光光度计;

(2)2 000rpm离心机

(3)5ml移液管;

(4)微量加样器;

(5)20ml试管

2.试剂

(1)12%三氯醋酸液:CCl3COOH 12g加水100ml溶成。血清除蛋白用。

(2)11.5%三氯醋酸液:空白及标准稀释液用。

(3)磷标准液

①贮存液:纯KH2PO40.585 3g加水溶成1L。放冰箱中保存。此液3ml中含磷0.4mg。

②应用液:取上液20ml,用11.5%三氯醋酸液准确稀释成100ml。此液3ml中含磷8μg。

(4)硫酸亚铁钼酸铵液

①10%钼酸铵5mol/L硫酸液:先配制5mol/L硫酸液,向约600ml水中慢慢加入浓硫酸278ml边加边摇匀,冷后加水成1L,混匀。

称取(NH4)6Mo7O24·4H2O 50g,放大烧杯中,边摇边加5mol/L H2SO4液约400ml,全溶后移入500ml量杯中,并用5mol/L H2SO4液冲洗烧杯,使全部移入容量瓶中,加5mol/L H2SO4液到刻线,混匀。

②硫酸亚铁钼酸铵液要在临用前新配。移取上液10.0ml放入100ml干净的容量瓶中,加水约70ml,混匀。加入FeSO4·5H2O粉末5g,加水到刻线,振摇使结晶全溶并混匀,必要时过滤。放棕色瓶中。

四、实验步骤

1.于试管或离心管中加12%三氯醋酸液3.8ml,加血清0.2ml,充分混匀,过滤或离心(1 500~2 000rpm,10min)。

2.取3只试管,做好记号,分别加入如下液体:

B(空白) 11.5%三氯酸液3ml

S(标准) 标准液(含磷8μg/ml)3.0ml

U(检品) 血清除蛋白上清3.0ml

3.各加硫酸亚铁钼酸铵溶液2ml,混匀,约10min后进行比色。用650nm或红色滤光板以空白管调零,读取标准管及检品管光密度值(Ds、Du)。

五、实验结果与分析

血清无机磷mg/dl=Du/Ds×0.008×100/(0.2×3/4)=Du/Ds×16/3

七、实验报告

参照《营养学》、《生物化学》原理分析。

八、注意事项

1.试剂为空白对照;

2.每组样品做2~3个平行;

3.正常参考范围:成人为3~5mg/dl(0.97~1.61mmol/L),儿童为(1.29~1.94mmol/L)。

免责声明:以上内容源自网络,版权归原作者所有,如有侵犯您的原创版权请告知,我们将尽快删除相关内容。

我要反馈