其他荧光免疫技术

五、其他荧光免疫技术

（一）荧光免疫测定技术

根据抗原抗体反应后是否需要分离游离的与结合的荧光标记物，将荧光免疫测定技术分为均相荧光免疫测定和非均相荧光免疫测定。均相荧光免疫测定不需要分离，如荧光偏振免疫测定；非均相荧光免疫测定则需要分离，如时间分辨荧光免疫测定。

1.荧光偏振免疫测定（flourescence polarization immunoassay，FPIA）　FPIA是一种定量荧光免疫测定技术，利用的抗原抗体竞争反应的原理。根据荧光素标记抗原与其抗原抗体复合物之间荧光偏振程度的差异，测定体液中药物、激素等小分子物质的含量。反应系统内同时加入待测抗原和一定量用荧光素标记的小分子抗原，使二者与有限量的特异性抗体竞争结合。当待测抗原浓度高时，大部分抗体被其结合，而荧光素标记的抗原多呈游离的小分子状态，在液相中转动速度较快，受偏振光激发后发射出的偏振荧光就较弱。反之，检测到的偏振荧光就越强。故偏振荧光的强弱程度与待测抗原浓度呈反比关系。通过检测反应体系中偏振光的大小，从标准曲线上就可以精确地得知样品中待测抗原的含量。

2.时间分辨荧光免疫测定（time resolved fluorescence immunoassay，TRFIA）　TRFIA是一种非同位素免疫分析技术，其基本原理是用镧系元素标记抗原或抗体，利用镧系元素螯合物能发出长寿命荧光的特点，延长测量时间，待短寿命的非特异性荧光（各种蛋白、组织成分、试管、仪器组件等在激发光的作用下发出的一定强度的荧光）完全衰退后再行测定，所得信号完全为长寿命镧系螯合物的荧光，从而有效地消除了非特异性荧光的干扰（图6-5）。用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，极大地提高了分析的灵敏度和特异性。

图6-18　时间分辨荧光免疫测定原理

（二）免疫芯片技术

免疫芯片是一种特殊的蛋白质芯片，也称抗体芯片。免疫芯片技术是将抗原抗体反应的特异性和电子芯片的高密度集成原理相结合的一种全新的检测技术。其基本原理是将各种蛋白质（抗原或抗体）按一定顺序高密度地排列在固相载体上，形成检测用芯片，与少量的待测样品发生反应，样品中的抗体（或抗原）与固相中的已知抗原（或抗体）同时产生特异性免疫反应，再通过标记物示踪方法即可一次同时完成数十种甚至数万种抗原或抗体的检测。

知识与技能拓展

免疫芯片技术的类型与特点

免疫芯片技术的类型很多，根据标记物的不同，分为荧光免疫芯片、酶标免疫芯片、放射性同位素免疫芯片、金标免疫芯片等。根据实验原理不同，分为双抗体夹心法免疫芯片、竞争法免疫芯片、间接法免疫芯片等。根据载体不同，分为固相芯片（平板芯片）和液体芯片（微球芯片）等。免疫芯片有着信息量大、操作简便、样品用量少、用途广、成本低、自动化程度高等优点。可以用荧光、酶、化学发光等显示结果，通过相应的扫描仪、计算机等仪器进行检测。

临床上免疫芯片主要应用于感染性疾病（病毒性肝炎、结核等）、心血管疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等疾病的检测，还可对病程进行监控和疗效评价。除此之外，免疫芯片还可应用于药物学的研究、流行病学研究、环境监测、食品卫生检查等方面。

思考题

1.结合血液学知识，分析流式细胞技术在血液病诊断中的重要性。

2.查阅资料，比较免疫芯片技术优于其他荧光免疫技术的特点。

（伍华颖陆红）