菌种的类型

时间：2022-11-17 百科知识版权反馈

【摘要】：食用菌的生长离不开菌种，食用菌的菌种一般称为“种子”，就是食用菌的孢子。固体培养基很多，在固体斜面培养基上接种培养得到的菌种称为固体菌种。液体菌种的培养特点是食用菌的菌丝体在液体培养基中呈絮状或球状。这种培养基种类多，应用广，是食用菌菌种生产和实验室中常用的培养基。食用菌母种和分离菌种及担孢子采集时用的培养基一般制成斜面试管培养基，一级菌种又称为试管斜面菌种。

项目一　菌种的类型

食用菌的生长离不开菌种，食用菌的菌种一般称为“种子”，就是食用菌的孢子。孢子处于休眠状态，但生产上都不用孢子直接播种，而是经过人工培养并进一步繁殖获得食用菌纯菌丝体，相当于高等植物的苗期生长状态。菌丝体生命力强，一般用试管、三角瓶或其他玻璃瓶、塑料袋等容器包装培养成生产科研实验室菌种。在自然界中，食用菌的子实体成熟后，弹射出孢子，遇适宜的外界环境条件的繁殖子代而在自然界中蔓延生长。

在生产上，菌种质量直接关系到产量的高低和栽培的成败。

一、菌种的类型

（一）根据生产程序分类

根据菌种生产、科研使用的目的和用途不同，分别称为一级母种、二级原种和三级栽培种（也称生产种）。一般食用菌菌种生产程序如图4－1所示。

图4－1　食用菌菌种生产程序

（1）一级母种：一级母种是接种在试管斜面琼脂固体培养基上生长的绒毛状菌丝，菌丝生命力强，是经鉴定遗传性能相对稳定的纯菌丝体。一级母种的来源包括：用育种手段得到，例如通过杂交育种、紫外线诱变或化学诱变剂进行处理使食用菌的菌丝的遗传基因改变性状而得到；从肉质的食用菌子实体本身直接通过菌组织分离及孢子采集或胶质耳木分离得到；从国内外引进优良的菌种。食用菌生产及科研用的母种一般用玻璃试管培养，便于观察、鉴别、保藏，称为试管种或一级母种。

（2）二级原种：将培养好的一级菌种在无菌的条件下转接到提前按配方配制好的以棉子皮、木屑、稻草、谷粒等为主的培养料培养基中，经扩大培养所得到的菌种，称为二级原种。如直接出菇成本高，则再扩大成栽培种降低成本。

（3）三级栽培种（生产种）：批量生产时为降低成本，把二级菌种再扩大转接到灭过菌的袋中或瓶中的培养基内，经适宜的条件培养而得到的菌种，称为三级栽培种（生产种）。三级栽培种只用于生产，不再扩大繁殖成菌种，因为连续转接会导致出菇率下降，造成菌种退化，不利于生产。

（二）根据培养基的物理状态分类

根据培养基配制后的物理状态，可以将菌种分为固体菌种、液体菌种及半固体菌种。

1.固体菌种

配制培养基时在液体培养基中加入1.5%～2%的琼脂制作成固体斜面培养基（狭义上的）。固体培养基很多，在固体斜面培养基上接种培养得到的菌种称为固体菌种。根据培养原料的不同，又可分为下面几种。

（1）固体培养基菌种：常用的有琼脂、马铃薯、葡萄糖培养基（简称PDA培养基），红薯片培养基等。

（2）木屑培养基菌种：以木屑为主要原料制作而成的培养基菌种。木耳、银耳、猴头菇、灵芝、香菇等菇类常用木屑菌种作为原种和栽培种。

（3）谷粒培养基菌种：以大麦、小麦、燕麦、黑麦、玉米、高粱、谷子等禾谷类为主要原料制备而成的培养基菌种，在生产中以小麦最为常用。麦粒培养基营养丰富，适合于食用菌菌丝的生长。麦粒菌种具有菌丝生长快、生命力强、出菇多、产量高等优点。

（4）粪草培养基菌种：以粪、草为主要原料制作而成的培养基菌种。粪草先经过发酵然后配制成培养基，常用于草菇菌种。

（5）木楔培养基菌种：以木楔形小木块或锥形小木块为主要原料制备的培养基经过常规灭菌接种培养成的菌种。用于银耳、木耳、香菇等的段木生产和代料人造菇木生产。

2.液体菌种

不加琼脂配制而成的液态的培养基称为液体培养基。液体培养基采用常规灭菌，在无菌的条件下而接种培养成液体菌种。液体菌种的培养特点是食用菌的菌丝体在液体培养基中呈絮状或球状。液体菌种采用摇瓶培养和深层发酵技术培养，经过适应阶段的培养后，具有发菌快、周期短、菌丝洁白健壮、菌龄一致等优点，目前用于科研栽培和小面积的生产，尚未在生产上大面积推广应用。

3.半固体菌种

配制培养基时，在液体培养基中加入0.3%～0.6%的琼脂制作成半凝固培养基，称为半固体培养基。一般用于观察细菌有无鞭毛，用在食用菌菌丝培养中应用较少。

二、菌种培养基的配制

（一）培养基根据营养物质的分类

根据营养物质的种类不同，可将培养基分为三种类型：天然培养基、合成培养基和半合成培养基。

（1）天然培养基　利用化学成分不太清楚的天然物质配制而成的培养基称为天然培养基。各种农副产品及其下脚料（如小麦、玉米、马铃薯、胡萝卜、麦麸、木屑等）以及动植物组织浸出液（如牛肉膏、麦芽汁、肉汤等）均可作原料。这些有机物质来源广，价格便宜，营养丰富，是食用菌生产中最常用的培养基。

（2）合成培养基　利用已知成分和已知数量的化学试剂（无机盐类）配制而成的培养基称为合成培养基。这种培养基成分清楚，重复性强，但价格较贵，一般只用于食用菌研究。

（3）半合成培养基　利用有机物质和无机盐类配制而成的培养基称为半合成培养基。这种培养基种类多，应用广，是食用菌菌种生产和实验室中常用的培养基。

（二）配制培养基的一般原则

配制培养基的一般原则如下。

（1）具备所需的各种营养物质。

（2）注意各种物质的比例和碳氮比。

（3）调整至一定的酸碱度（pH值）。

（4）通过灭菌使其呈无菌状态。

（三）母种培养基的种类及配制步骤

1.母种培养基的种类

食用菌母种和分离菌种及担孢子采集时用的培养基一般制成斜面试管培养基，一级菌种又称为试管斜面菌种。母种培养基的种类如下。

（1）马铃薯葡萄糖培养基（PDA培养基）：马铃薯（去皮去芽眼）200g、葡萄糖20g、琼脂18～20g、水1000mL。也可用蔗糖取代葡萄糖，即为PSA培养基。

（2）综合马铃薯培养基：马铃薯（去皮去芽眼）200g、葡萄糖20%、磷酸二氢钾3g、B族维生素110 mg、硫酸镁1.5g、琼脂18～20g、水1000mL，pH值5.8～6.2。广泛适用于多种食用菌母种的分离、培养和保藏。

（3）马铃薯玉米粉培养基：马铃薯200g、蔗糖20g、玉米粉50g、琼脂20g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.5g、水1000mL。适用于香菇、黑木耳、猴头菇的培养。

（4）马铃薯黄豆粉培养基：马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂20g、黄豆粉20g、碳酸钙10g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.5g、水1000mL。适用于蘑菇、草菇。

图4－2　母种培养基制作流程

1—分装；2—塞棉塞；3—打捆；4—灭菌；5—摆斜面；6—接种培养

（5）葡萄糖蛋白胨琼脂培养基：葡萄糖20g、蛋白胨20g、琼脂20g、水1000mL。

（6）蛋白胨、酵母、葡萄糖琼脂培养基：蛋白胨2g、酵母膏2 g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾0.5g、磷酸氢二钾1g、葡萄糖20g、B族维生素120mg、琼脂20g、水1000mL。配方（6）适用于培养冬虫夏草、蛹虫草、平菇、白灵菇、杏鲍菇等。

2.母种培养基制作方法（以PDA培养基为例）

母种培养基的配制过程（见图4－2）及注意事项如下。

（1）计算。按照选定的培养基配方，计算各种成分的用量。

（2）称量。将马铃薯洗净去皮，去芽眼，按配方称量。

（3）煮汁。首先要选择合适的浸煮容器，一般选用铝锅、搪瓷缸或玻璃烧杯等，不能用铜、铁器皿，以免铜锈或铁锈混进培养基中。将称量好的马铃薯切成花豆大小块，加水约1200mL，煮沸，计时，再用文火保持沸腾20～30min，并适当搅拌，使营养物质充分溶解出来，用2～4层纱布预湿后过滤，如过滤的土豆汁不足，可用水补充到1000mL，倒回干净的小锅内，加入琼脂20g，温火加热使其完全熔化，再加入葡萄糖和其他营养物质，溶解后，用pH试纸检测其pH值，可根据需要用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸调整至适宜的酸碱度，再分装试管。

（4）分装试管。将配制好的培养基趁热分装试管，常用的试管为φ18mm×180mm或φ20mm×200 mm的玻璃试管。分装试管的量掌握在试管长度的1/6～1/5。注意分装时，培养基不要粘在试管口壁上，如粘上则用纱布擦干净后再塞棉塞，否则棉塞上容易滋生杂菌。

（5）塞棉塞。分装完毕，塞上棉塞，注意棉塞要松紧适度，以用手提起棉塞而试管不脱落为度。棉塞的长度为3～5cm，塞入试管中的长度约占总长的2/3。制作棉塞时宜选用质量好的普通棉花或用透气胶塞代替棉塞，不用脱脂棉（成本高）。

（6）灭菌和摆斜面。将塞上棉塞的试管按5～6支一捆，用两层报纸或一层牛皮纸捆好，放入高压锅内灭菌。在0.1～0.12MPa压力下，灭菌30min，待其压力降至零时，拧松螺旋，打开压力锅盖，取出试管摆放斜面，斜面的长度为试管长度的1/2为宜，凝固后备用。

（四）原种及栽培种培养基的种类及配制步骤

1.原种和栽培种培养基的配方

（1）麦粒或玉米粒66%、木屑30%、碳酸钙2%、石灰粉1%、白糖1%、含水量55%。

（2）木屑78%、麸皮20%、石膏粉1%、蔗糖1%、含水量55%。

（3）棉子壳78%、麦麸20%、石膏粉1%、蔗糖1%、含水量60%。

（4）木屑和短枝条或小木片各40%、麸皮20%、含水量60%，制作栽培种培养基。

（5）麦粒或玉米粒66%、小麦秆或裸麦秆（切碎，长2～3cm）30%、石膏2%、石灰粉1%、白糖1%、含水量55%。小麦秆或裸麦秆泡湿，装瓶，高压灭菌后备用。小麦、裸麦、高粱、玉米、小米等谷粒浸泡，煮至“无白心但表皮不开裂”，捞出沥水至表面无水汽后再加其他成分，装瓶，高压灭菌后备用。

2.接种

可以用培养3～4天的液体菌种转接原种和栽培种。若用固体斜面母种，必须加大接种量，接种量最好为2～3块。