耳蜗场电位记录方法

（一）慢性外耳道电极记录

1．电极置入记录法　取直径为0．1mm，长约6cm的绝缘不锈钢丝，从中弯折互相扭紧。弯折端作电极的插入端，在此端和外端分别刮去绝缘漆约2mm和4mm，再将在离电极插入端3mm处弯折成30°后即可备用（图9－1A）。电极插入端不宜过长，以免穿破鼓膜引起感染。

豚鼠在全麻（44mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射）和无菌条件下插入电极。先在耳郭后缘自后向前作一约2．5cm长的弧形切口。分离颞肌和鼓膜，露出颞骨及上鼓室外侧骨面，再循上鼓室外侧骨壁的下缘，将外耳道后上方皮片与骨性外耳道壁作钝性分离，直至骨环。用棉球吸干骨面渗出液后，将上述备好的电极插入剥离的皮片与骨壁之间。迅速用牙托粉将电极的中段固定于颞骨及上鼓室外侧骨壁的表面。用同法做另一侧耳的电极植入。最后在切口处撒少量磺胺粉后缝合切口，电极外端露于颅顶皮肤表面（图9－1B，C）。

图9－1　电极置入记录法

A．电极；B．切口；C．电极插入部位

2．耳蜗电位记录法　将豚鼠置于自制的固定箱内，于隔声屏蔽室内、在清醒状态下记录听神经复合动作电位（CAP）和微音电位（CM）（图9－2）。植入的外耳道电极作引导电极、刺入同侧耳廓和鼻尖处的银针电极分别作参考和接地电极。测试系统采用电反应测听仪。耳机给声，耳机与测试耳外耳道入口的距离约3cm。滤波带通80～1　600Hz，用密疏相交替的宽频短声诱发CAP；滤波带通100～8　000Hz，用密疏相交替的滤波短声、同时交替变换放大器输入端的极性诱发CM。声刺激重复率均用10次/s，引出的反应经叠加100～150次后输入X－Y记录仪描记。刺激声强自125dB（峰值等效声压级，Pe SPL）以每10dB一档衰减，直至无反应。在阈值反应附近则以5dB一档衰减，刚能引出CAP波形的声强视为CAP反应阈。自刺激起始点至CAP（N1）峰尖的时程作为该声强级的CAP潜伏期。自基线至CAP（N1）峰尖的幅度作为CAP的振幅。此法成本低，操作简单，只要有电反应测听（ERA）设备的单位均可用此法记录出动物的耳蜗电位。

图9－2　在正常豚鼠埋置电极后第120天记录的CAP和CM

（二）慢性圆窗电极记录

在全麻下行左耳慢性圆窗银球电极植入术。用盐酸氯胺酮（0．1g/kg体重）和枸橼酸芬太尼（0．1mg/kg体重）分别作深部肌内注射行豚鼠全身麻醉。麻醉生效后，于左侧耳后和颅顶剪毛，沿左侧耳郭后缘切开一长约1．5cm的切口，剥离肌肉，暴露听泡，将骨衣剥离干净（包括骨缝）。在听泡中下1/3处用电钻钻开一直径约2mm的小孔，在手术显微镜下透过此孔直视到圆窗龛上，银球电极除前方的银球外涂有绝缘层（Teflen）。用示波器观察给短声后动物的CAP反应，证实银球电极放置准确（图9－3）。用按比例调制好的磷酸锌牙科水泥封闭听泡骨窗并以此固定住银球电极，再于头顶作长约3cm的纵行切口，深达骨膜并向两侧剥离骨膜，将银球电极的另一端沿头皮穿出。于左右顶骨上分别以电钻钻出小孔（不能伤及硬脑膜），在此各固定一颗铜螺钉并以电焊焊接上带绝缘漆的铜丝，分别作为参考电极与地线，连同银球电极共3个电极分别焊接于电极插座的铜柱上。用磷酸锌牙科水泥在颅顶固定电极与电极插座，前后缝合颅顶伤口。术毕。术后动物被精心饲养7d。检查动物双耳无化脓，继续下一步实验，记录CM和CAP（图9－4，图9－5）。

图9－3　慢性圆窗电极埋置过程中CAP监视

图9－4　正常豚鼠微音电位波形

其幅度随声音强度变化，高强度趋于饱和

图9－5　正常豚鼠短声诱发的复合动作电位阈值（15dB peSPL）

此法较“（一）慢性外耳道电极记录”法置入的慢性电极保持时间更长，可达1年之久。除此，还可同时置入慢性的听皮质电极，记录皮质原发反应（premier response，PR）可在清醒状态下，远期动态观察动物模型从周边到中枢电位的变化过程。对于听觉中枢可塑性的研究颇有用途。

（三）经面神经管引导电极记录

银丝电极经面神经管引导耳蜗电位的方法较简便，易于操作，通常用于急性实验或短期存活动物实验。电极植入步骤如下。

（1）麻醉豚鼠，耳后切口暴露乳突。

（2）用小棉球紧贴乳突骨壁向骨性外耳道方向分离耳后肌肉和其他软组织直至位于乳突和骨性外耳道之间的面神经充分暴露。

（3）用分离针从面神经管内挑出面神经，将直径为0．5mm的表面绝缘银丝轻轻插入面神经管内，插入深度约3mm。

（4）用牙托粉或者生物胶在面神经管口处固定银丝，再调制牙托粉将电极银丝固定于颅顶骨壁。

（5）记录电极连接经颅顶引出的面神经管银丝电极线，针形参考电极插入同侧耳垂根部，针形接地电极插入鼻尖。用常规的参数和刺激声即可记录出CM、SP和CAP。

如果仅做急性实验，例如做全耳蜗灌流实验时，也可将银球电极置于圆窗龛处；在中阶记录EP时，也可同时记录中阶的CM、SP 和CAP。