【摘要】：通过在Tris/acetate/EDTA缓冲液中进行琼脂糖凝胶电泳从载体中分离目的DNA，用5mg/ml溴乙啶染色。-20℃孵育过夜后，超速离心机10000r，离心5min，收集沉淀，重悬沉淀于Elutip缓冲液。清洗与干燥过程极其重要，因为残余的盐和乙醇对受精卵的发育是致命的。注射TE缓冲液重悬沉淀，缓冲液必须是Milli-Q纯化水配制。
1.目的基因的克隆参照第2章第四节。
2.先用限制性核酸内切酶将目的基因消化成线性分子，保证浓度为1ng/μl，纯度高，并尽可能不带有载体的序列（仅保留启动子及开放阅读框、终止序列）。
3.DNA的制备程序
（1）通过在Tris/acetate/EDTA缓冲液中进行琼脂糖凝胶电泳从载体中分离目的DNA，用5mg/ml溴乙啶染色。
（2）用长波紫外光显影，为防止对插入DNA的溴乙啶的破坏。
（3）切下目的基因所在凝胶片，电泳制备目的DNA。
（4）乙醇沉淀目的DNA。在样品中加入1/10体积的3mol/L乙酸钠，混匀，再加入2～2.5倍体积无菌100%乙醇进行沉淀。
（5）-20℃孵育过夜后，超速离心机10000r，离心5min，收集沉淀，重悬沉淀于Elutip缓冲液。
（6）用Elutip-D微型柱（Whatman3mM）对目的DNA过柱处理。
（7）按照步骤4重新沉淀DNA，用70%乙醇漂洗沉淀2～3次，真空干燥沉淀。清洗与干燥过程极其重要，因为残余的盐和乙醇对受精卵的发育是致命的。
（8）注射TE缓冲液（10mmol/LTris-HCl/0.1mmol/LEDTA，pH7.5）重悬沉淀，缓冲液必须是Milli-Q纯化水配制。
（10）用注射TE缓冲液调整目的DNA的浓度在5～10ng/ml。
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
