流式细胞仪检测细胞大小

（一）实验目的

流式细胞仪可以检测细胞自发荧光的散射光信号，细胞在液柱中与激光束相交时向周围360°立体角方向散射的光线信号，它的强弱与细胞的大小、形状、胞内颗粒折射等有关，主要分为前向散射光和侧向散射光。前向散射光（forward scatter，FS）：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度（0.5°～10°）向前方散射的讯号用于检测细胞等粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。侧向散射光（side scatter，SS）：激光束照射细胞时，光以90°角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。这里主要介绍利用前向角散射光（forward scatter，FS）的平均荧光强度来检测细胞的大小。

（二）试剂与仪器

PBS，细胞悬液，400目筛网，流式细胞仪。

（三）实验流程

1.细胞培养至70%～80%融合时，PBS洗2次，0.25%胰酶消化，收集离心管中。

2.计数细胞后，每管含1～106个细胞，上机检测。

3.应用流式细胞细胞仪，以FSC的平均荧光强度来反映细胞的大小。

（四）注意事项

保证细胞良好的状态，严格计数细胞。

（五）图像示例

细胞大小图形，见图1-20。

图1-20　流式细胞仪检测FSC荧光强度依次增强，反应细胞A→C逐渐增大

参考文献

[1]Zhuo L,Cai G,Liu F,et al.Expression and mechanism of mammalian target of rapamycin in agerelated renal cell senescence and organ aging.Mech Ageing Dev,2009,130:700-708.

[2]Wu D,Chen X,Guo D,et al.Knockdown of fibronectin induces mitochondria-dependent apoptosis in rat mesangial cells.J Am Soc Nephrol,2005,16:646-657.