血浆纤溶酶原活化抑制剂的检测

PA的活化主要被血浆纤溶酶原活化抑制剂（plasminogen activator inhibitor，PAI）调节，通过与PA形成一可逆的复合物，最重要的PAI是PAI-1，可抑制血管内皮细胞释放后短时间内PA的活性，PAI释放增加激活PA不足，带来纤溶活性下降，导致静脉及动脉血栓形成，另一方面，少数情况下，PAI释放减少激活PA增加可引起出血。PAI-1是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，分子量为52kD。由血管内皮细胞将其活性形式释放至循环中，由于构象变化，其转化为活性形式的半衰期近30min。相反，存在于血小板α-颗粒中的PAI-1及血循环中90%的PAI-1都以无活性或潜在活性形式存在。PAI-1与S蛋白结合后稳定了血浆中的活性PAI-1，但不能避免其被凝血酶或活化的C蛋白降解。除了PAI-1之外，还有三种PAI（PAI-2、PAI-3和PCI），其中只有PAI-2在妊娠期间会在循环中被检出。

（一）测定PAI和PAI-1的活性（plasminogen activator inhibitor activity，PAI：A）

【原理】　通过附加的PA抑制和经纤溶酶原活化的PA剩余活性的显色测定，可以对PAI-1活性进行间接测定。t-PA和u-PA都可以用作为标记酶。因为孵育时间仅为5～15min，所以只有最快速的活化PAI才能被测出，例如PAI-1。α2-抗纤溶酶的影响可以通过反应混合物的酸化作用或氧化灭活加以清除。方法学略。

【参考值】　100～1 000抑制单位/L。

PAI-1活性可以以t-PA或u-PA抑制单位来表示（1u-PA抑制单位相当于7.8t-PA抑制单位）。这是因为用于测定体循环中不同形式的t-PA和PAI-1的免疫化学测定法，其灵敏度和特异性一般都有显著差异，所以测定系统应该统一。

（二）测定PAI-1抗原（plasminogen activator inhibitor antigen，PAI：Ag）

【原理】　多种酶免疫测定都适用于PAI-1抗原的免疫化学测定，运用单克隆抗体，能检出PAI-1的4种可能的形式（活化、潜在、t-PA结合和u-PA结合）的变化范围。方法学略。

【参考值】　＜1U/ml。

【临床意义】　测定t-PA和PAI-1（体循环纤溶系统中最重要的调节因子），可以估计出血液中的纤溶蛋白。PAI-1释放增加和t-PA释放减少，会导致止血系统有血栓形成的倾向。虽然PAI-1缺乏或t-PA过量释放会导致出血的危险性升高，但是其在实际临床应用中关系不大，因为其发生率极低。在30%～40%的特发性深静脉血栓患者中，特别是在受到刺激后，由于其PAI-1释放增加或t-PA释放不足，通常会导致纤维蛋白溶解失调。同时，血浆PAI-1水平升高是最常见的病因。但是，至今尚未明确纤溶下降是否是特发性静脉血栓形成的病因。此外，一些研究表明术前PAI-1水平与术后深静脉血栓形成的危险性高度相关，而另一些研究却未证实此相关性。许多流行病学调查已经表明PAI-1水平升高时会使发生急性心肌梗死或反复梗死的危险性升高。PAI水平升高是否是血管变化的原因还有待进一步证实。

血浆PAI-1水平会受到多种因素的干扰：肥胖、吸烟、三酰甘油（甘油三酯）水平升高、胰岛素增加、高血压及低体力活动都与PAI-1水平的升高相关；体重下降、戒烟、改善新陈代谢及增加体力活动会导致PAI-1水平下降。此外，PAI-1是一种急性时相反应蛋白。在炎症、感染、恶性肿瘤、败血症和术后期间，血浆水平会暂时升高。肝脏功能异常引起的肝脏清除率下降也会导致血浆PAI-1水平升高。妊娠期间，循环中除了PAI-1外还会产生PAI-2。在孕期第16～20周其浓度达到可检出的范围，至孕期的第34周其浓度达到最高峰，PAI要高于正常值的2～3倍。

【问题和注释】　血液采集由于PAI释放的昼夜节律不同，早晨水平高，下午水平低，所以PAI-1与t-PA的测定时间应该定于早晨8：00～10：00。在采血前病人至少应先休息20min，这是因为体力活动的增加会导致t-PA释放增加。为了避免在检测PAI-1抗原期间血小板中释放出潜在的PAI-1，应该在血样采集后立即将样品放置4℃冷却，制备低血小板血浆。