粒细胞动力学检测

氚标记胸苷（3 H-TdR）测定

【原理】　粒细胞在培养过程中加入PHA或特异性抗原刺激后，进入有丝分裂期（S期）。此时加入3 H-TdR，可被细胞摄入参与DNA合成，测定3 H-TdR的掺入量，即可判定粒细胞的增殖水平。

【试剂】

1.3 H-TdR 37MBq 3 H-TdR，用生理盐水稀释10倍，4℃保存。其量为每管74kBq。

2.0.5g/L三氯醋酸 三氯醋酸5g，溶于100ml蒸馏水中。

3.闪烁液 PPO 6g，POPOP 0.75g，萘75g，二甲苯1 000ml，乙二醇甲醚550ml，混匀。

【操作方法】

1.分离周围血或骨髓中粒细胞。

2.分离的粒细胞培养（含PHA）48～52h，加入3 H-TdR，每管74kBq。继续37℃温育72h收获。

3.培养结束后，轻轻吸出培养上清液，测定管中加蒸馏水6ml，溶解红细胞，然后再用0.6mol/L氯化钠2ml恢复等渗。3 500r/min离心10min，弃去上清液，每管中加生理盐水2ml，混匀后滴入装在抽滤装置上的49型玻璃纤维滤片中央，用生理盐水10ml冲洗纤维滤片，再于滤片上滴加0.5g/L三氯醋酸2～3ml使样品固定，用无水乙醇2ml洗脱一次。将滤片放80℃干燥。将烘干的滤片放入盛有5ml闪烁液的小瓶中，置液体闪烁仪中测cpm值。每份标本测3～4个复本。

【计算公式】

空白对照即不用PHA或特异抗原刺激的标本管。

【正常参考值】　SI＜2。

【临床意义】　了解粒细胞的增生状态。在正常情况下，体内粒细胞在分裂池（骨髓）、循环池（血液）及边缘池（组织）之间处于平衡状态，末梢血中成熟粒细胞数为（4～10）×109/L。在血液病等病理情况下，这种平衡状态受到不同程度的破坏，即可能出现异常。

【注意事项】

1.培养基成分对转化率影响较大，小牛血清需灭活后筛选，培养液pH应在7.2～7.4。

2.培养时要有足够的氧气，一般10ml的培养管内液体总量不要超过2ml。

3.3 H-TdR法影响因素较多，需准确加样，精细操作，严格控制试验条件。