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异丙醇沉淀试验

时间:2022-06-30 百科知识 版权反馈
【摘要】: 不稳定血红蛋白较正常血红蛋白更容易裂解,非极性溶剂异丙醇,会使不稳定血红蛋白分子内氢键结合减弱,血红蛋白的稳定性下降。正常血红蛋白在40min内保持稳定。不稳定血红蛋白在加入异丙醇后即变浑浊,并形成绒毛状沉淀。加入新鲜制备的10%血红蛋白液0.1ml,混匀,置37℃水浴中,分别于5、10、20、30min观察。 对检查不稳定血红蛋白敏感简便,不稳定血红蛋白存在时常于5min时出现浑浊,20min开始出现绒毛状沉淀。

【原理】 不稳定血红蛋白较正常血红蛋白更容易裂解,非极性溶剂异丙醇,会使不稳定血红蛋白分子内氢键结合减弱,血红蛋白的稳定性下降。正常血红蛋白在40min内保持稳定。不稳定血红蛋白在加入异丙醇后即变浑浊,并形成绒毛状沉淀。

试剂

1.pH 7.4的0.1mol/LTris缓冲液 取Tris 1.21g溶于少量蒸馏水中,滴加1mol/L盐酸溶液调节pH为7.4,加蒸馏水至100ml。

2.17%异丙醇缓冲液 17ml异丙醇加入上述Tris缓冲液至100ml。

【操作方法】 取17%异丙醇缓冲液1ml加入有塞试管中,37℃水浴5min以上。加入新鲜制备的10%血红蛋白液0.1ml,混匀,置37℃水浴中,分别于5、10、20、30min观察(血红蛋白溶液制备见血红蛋白电泳)。

【参考值】 正常血红蛋白在保温40min内保持稳定不见浑浊。

【临床意义】 对检查不稳定血红蛋白敏感简便,不稳定血红蛋白存在时常于5min时出现浑浊,20min开始出现绒毛状沉淀。在HbF、HbH、HbE含量高(>4%)时、G6PD缺乏及珠蛋白生成障碍性贫血时均可出现阳性结果,应做进一步检查。

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