凝血功能检查

实训五　凝血功能检查

实训目的

凝血功能是指机体在血管受损时所具有的由凝血因子按照一定顺序相继激活而生成凝血酶，最终使纤维蛋白原变成纤维蛋白而促使血液凝固的能力。凝血功能检查的临床意义为：①检测出血性疾病和血栓性疾病；②手术前止血功能的判断；③临床用药的监测；④弥散性血管内凝血的检测。

实训内容

1.凝血功能检查　主要包括血浆凝血酶原时间(PT)测定。

2.活化部分凝血活酶时间(APTT)测定。

3.血浆凝血酶时间(TT)测定。

4.纤维蛋白原(FIB)测定。

实训准备

一次性塑料注射器、压脉带、碘附、消毒棉球或棉签、硅化玻璃试管或塑料管、试管架、离心机、移液枪、吸头、血凝仪(配套的试剂、热敏打印纸)、记录本、记号笔等。

实训方法

(一)标本的采集与处理

静脉采血，0.109M(3.2%)枸橼酸三钠与全血按1∶9比例迅速混匀。将标本和检验申请单进行核对，防止“张冠李戴”。逐一进行检查，并把结果、签名和报告检验日期打印在报告单上。将采集的血液按3 000转/分钟(2 500 g)离心15分钟，分离血小板血浆。用塑料移液管取出上层血浆，2小时内检测完毕。

(二)项目检测(以RT-2204C半自动凝血分析仪为例)

1.开机　打开仪器背面的电源开关，等待约10秒钟，系统进入初始化流程，初始化进度状态显示在窗口中(图5-1)。

图5-1　开机

开机流程结束后，进入主菜单窗口(图5-2)。

图5-2　主菜单窗口

2.在主菜单中按样品测试键，进入项目测试。(通常情况下仪器开机后需要预温15～30分钟，如果温度未达到预定范围，则会显示等待窗口。请务必保证测试时温度达到预定范围，否则会影响结果的准确性!)

3.样品测试(以上海太阳试剂为例)

(1)PT检测

试剂准备：PT试剂恢复至室温后，按瓶签上标明剂量，准确加入PT复溶液，置37 ℃预温30分钟，用前颠倒混匀。

取待测(质控或参照)血浆50 μl，37 ℃孵育180秒，加入已预温至37 ℃的PT试剂100 μl，记录凝固时间。

(2)APTT检测

试剂准备：久置产生鞣花酸酯沉淀，用前颠倒混匀，不影响质量。

取待测(质控或参照)血浆50 μl，加入APTT试剂50 μl，37 ℃孵育300秒，加入已预温至37 ℃ CaCl2溶液50 μl，记录凝固时间。

(3)TT检测

试剂准备：TT试剂冻干品中加蒸馏水后，应在3分钟内完全溶解，溶解后呈无色透明溶液，不得有异物和沉淀。

取待测(质控或参照)血浆50 μl，37 ℃孵育180秒，加入已预温至37 ℃的TT试剂50 μl，记录凝固时间。

(4)FIB检测

试剂准备：取50 μl血浆加入450 μl生理盐水中，作1∶10稀释。

取1∶10稀释的血浆100 μl，37 ℃预温180秒，然后加入50 μl已预热的凝血酶试剂，记录凝固时间。

(三)正常结果

PT:10～14秒。超过参考值3秒以上为异常。

APTT:22～38秒。超过参考值8秒为可疑；超过参考值10秒为异常。

TT:10～16秒。超过参考值3秒为异常。

FIB:2～4 g/L。

(四)注意事项

1.原包装试剂2～8 ℃密闭保存，有效期内稳定。

2.开封后，2～8 ℃或室温(18～25 ℃)下保存，3个月稳定。

3.不用时2～8 ℃保存，可延长使用期，严禁冻融。

4.与样品接触的所有器材必须采用塑料或硅化玻璃材质。

5.某些药物如口服避孕药、雌激素、门冬酰胺酶，影响测试结果。

6.样本采集和处理不当，都会使凝固时间缩短或延长。

7.妊娠和急性炎症会影响某些测试结果。

8.仪器用电源应使用标准的带地线的三芯电源插座且接地良好。打开仪器，预温10分钟，待温度指示灯亮之后，方可进行操作，以保证测量精密度。

9.使用的样品杯应为一次性产品，以免影响测量精密度。

10.加入试剂时应规范操作，避免产生气泡，并且保持动作的一致性。为了保证测试结果的准确性，请保证按键动作与加入启动试剂在同时发生。

实训结果

填写或粘贴检验报告单。

实训思考

1.如何分离乏血小板血浆？为何要分离乏血小板血浆？

2.检测时用加样枪加血浆与试剂有哪些要求？

3.PT、APTT、TT、FIB检测，临床意义有哪些？

病例分析

1.某患者，14岁，学生，曾于8年前因手指被割破后流血不止，以后经常鼻出血，关节青紫肿痛，活动受限。近半个月来，左眼球红肿高突，视力减退，肘腿关节肿大，步履困难。

首先考虑该患者为何种疾病？建议做何种检查？可能会出现的阳性结果有哪些？

2.某男性患者，21岁，因骑自行车被刮倒，膝关节受伤，血肿达半月不消。检查结果如下：血小板150×109/L，凝血时间23分钟(正常对照12分钟)，APTT 90秒(正常对照30秒)。

请问：①以上检查结果哪些不正常？②考虑以上检查结果，你认为哪种病的可能性大?

3.李某，女，25岁，已婚，妊娠39周，3个小时前开始下腹部有阵发性痛就诊入院，随即分娩后觉气促加重，呼吸达28次/分，心悸，心率达130次/分，血压下降至11/8 kPa，产道出血，出血量约达1 200 ml以上，且流出血不凝固。实验检查结果：APTT 85秒(对照48秒)，PT 25秒(对照14秒)，TT 21秒(对照12秒)，FIB 0.98 g/L。3P试验(3+)，外周血红细胞碎片>6%，D-二聚体试验(胶乳法)(2+)。

本例产后出现产道大出血，应考虑哪些疾病？为明确诊断，需进一步做哪些实验室检查？

(孟德娣　徐素仿)