细胞周期时间的测定

二、细胞周期时间的测定

标记有丝分裂百分率法（percentage labeled mitoses，PLM）是常用的测定细胞周期时间的方法。首先对测定细胞进行脉冲标记、定时取材、用放射自显影技术显示标记细胞，统计标记有丝分裂细胞百分数用于测定细胞周期。

有关名词如下：

TG1：G₁期的持续时间。

T_G2：G₂期的持续时间。

T_S：S期的持续时间。

TM：M期的持续时间。

T_C：一个细胞周期的持续时间。

PLM：标记的有丝分裂细胞所占的比例。

TDR：胸腺嘧啶核苷，是DNA的特异前体，能被S期细胞摄入，而掺进DNA分子中。通常使用的是3H或者14C标记的TDR。

测定原理（图4－2）如下：

（1）待测细胞经3H－TDR标记后，所有S期细胞均被标记。

（2）S期细胞经G₂期才进入M期，所以一段时间内PLM＝0。

（3）开始出现标记M期细胞时，表示处于S期最后阶段的细胞，已渡过G₂期，所以从PLM＝0到出现PLM的时间间隔为T_G2。

（4）S期细胞逐渐进入M期，PLM上升，到达最高点的时候说明来自处于S期最后阶段的细胞，已完成M期，进入G₁期。所以从开始出现M到PLM达到最高点（≈100％）的时间间隔就是TM。

（5）当PLM开始下降时，表明处于S期最初阶段的细胞也已进入M期，所以出现PLM到PLM又开始下降的一段时间等于T_S。

（6）从PLM出现到下一次PLM出现的时间间隔就等于T_C，根据T_C＝T>_G１＋T_S＋T_G2＋T_M即可求出的TG_G1长度。

事实上由于一个细胞群体中T_C和各时相不尽相同，第一个峰常达不到100％，以后的峰会发生衰减，PLM不一定会下降到零，所以实际测量时，常以（T_G2＋1／2T_M）－T_G2的方式求出T_M。

图4－2　细胞周期各阶段的时间与PLM的关系