（一）T细胞功能的测定
1．E花环试验 人类的T细胞表面具有绵羊红细胞（Erythrocyte）受体（即CD2），又称E受体。在体外能与绵羊红细胞结合形成花环样结构。试验时将外周血中分离的PBMC与绵羊红细胞按一定比例混合，温育后置4℃过夜，取细胞悬液涂片、染色、计数淋巴细胞，凡黏附有3个或3个以上绵羊红细胞的淋巴细胞即为T细胞，由此可计算出T细胞数的百分率，正常为70%～80%。目前此方法主要用于T淋巴细胞的计数，而T细胞的数量在一定程度上代表了机体细胞免疫功能的强弱。
2．T细胞特异性抗原的检测 CD3是T细胞表面特有的抗原成分，可用其相应的单克隆抗体进行检测，常采用间接免疫荧光法。先用鼠抗人CD3单克隆抗体与人外周血淋巴细胞结合，再加入荧光标记的兔抗鼠球蛋白抗体，于荧光显微镜下观察并计数荧光阳性细胞的百分率，即T细胞总数。
3．T细胞亚群测定 不同的T细胞亚群含有其特有的分化抗原，如Th细胞含有CD4抗原，Tc细胞（CTL）含有CD8抗原，可用其相应的单克隆抗体，采用上述间接免疫荧光法进行测定。正常人CD4＋细胞与CD8＋细胞的比值约为2∶1，艾滋病患者的比值则小于1∶7。
4．T细胞增殖试验 T细胞在受到非特异性有丝分裂原（PHA等）或特异性抗原刺激后，可转化为淋巴母细胞。在细胞转化过程中细胞DNA合成增加，细胞形态改变，最终细胞分裂增殖。依据T细胞的转化率，可判断机体的细胞免疫功能水平。
试验采用外周血分离的PBMC或全血，刺激物常用PHA。常用的方法有3种：①形态学方法。将淋巴细胞与PHA共同温育72h，涂片染色后于光镜下计数淋巴母细胞数。转化细胞的形态特征为，细胞体积增大3～5倍，胞质丰富，含有空泡；核染色质疏松，出现1～3个核仁。一般计数200个淋巴细胞，计算出转化的百分率。正常值为70%左右。②MTT比色法。活细胞内有活性的线粒体作用于MTT，生成蓝色产物甲臜，其生成量与细胞代谢程度成正比，使用二甲基亚砜（DMSO）将其溶解后，通过酶标仪检测吸光值，可定量分析细胞的增殖水平。③放射性核素掺入法。胸腺嘧啶核苷为合成DNA的原料，按上述方法培养，在终止培养前8～16h，加入氚标记的胸腺嘧啶核苷（3 H-TdR），淋巴细胞在转化成母细胞的过程中DNA合成增加，3 H-TdR可被转化的细胞摄取。培养结束后，用液闪测定仪测定细胞内放射性核素的相对含量即代表淋巴细胞的转化能力。
5．细胞毒试验 是测定CTL细胞杀伤功能的一种试验。将受检者外周血分离的PBMC或纯化的CTL细胞与51Cr标记的靶细胞按一定比例混合，37℃温育后用γ计数仪检测上清液中51Cr的含量。靶细胞被杀伤得越多，上清液中51 Cr的含量越多，依此推算出杀伤活性的高低。此法可用于测定机体的抗肿瘤免疫功能。
6．迟发型超敏反应（DTH）的检测 此方法是体内检测细胞免疫功能的简便易行的皮试方法。其原理是外来抗原刺激机体产生免疫应答后，再用相同抗原作皮试可导致迟发型超敏反应，T细胞活化并释放多种细胞因子，产生以单个核细胞浸润为主的炎症反应，于24～48h发生，72h达到高峰。阳性反应表现为局部红肿和硬结，反应强烈的可以发生水肿，甚至坏死。细胞免疫功能正常者出现阳性反应，功能低下者则呈弱阳性或阴性反应。目前常用于检测某些病原微生物感染、免疫缺陷病和肿瘤患者的免疫功能测定等。皮试常用的生物抗原有结核菌素（OT）、纯蛋白衍生物（PPD）、链激酶／链道酶（SK／SD）等。
（二）B细胞功能的测定
1．膜表面免疫球蛋白检测 膜表面免疫球蛋白（mIg）为B细胞所特有，是鉴定B细胞的可靠指标。应用荧光素或酶标记的抗人Ig抗体通过直接免疫荧光法或免疫酶技术检测mIg，正常人外周血中mIg＋细胞一般为8%～12%。
2．CD抗原检测 B细胞表面抗原有CD19、CD20和CD21等分化抗原，其中有些是全部B细胞所共有，有些仅活化B细胞特有。据此可用相应的单克隆抗体，通过直接免疫荧光法或免疫酶技术加以检测。正常人外周血中CD20＋细胞占淋巴细胞总数的8%～12%。
3．血清免疫球蛋白含量测定 免疫球蛋白为B细胞接受抗原刺激后转化为浆细胞分泌的球蛋白，检测血清免疫球蛋白水平可判断B细胞功能。常用指标有血型抗体、IgG、IgM、IgA等。
4．B细胞增殖试验 与T细胞增殖试验相似，B细胞受丝裂原刺激后，被激活发生分裂、增殖反应，通过检查细胞增殖程度，可反映B细胞的功能。小鼠B细胞可用细菌脂多糖（LPS）作为刺激物，人则用含SPA的金黄色葡萄球菌菌体及抗IgM抗体作为刺激物。
5．抗体形成细胞测定 常采用溶血空斑试验，即测定对绵羊红细胞（SRBC）产生抗体的B细胞数目。基本过程是：首先用SRBC免疫小鼠，无菌取脾制备成脾细胞（含致敏B细胞）悬液；将脾细胞悬液与单层贴壁的SRBC混合，如被SRBC致敏的B细胞在体外培养的过程中，合成并分泌溶血素，溶血素则与周围的SRBC结合，在补体参与下，出现溶血反应，形成空斑。每一个空斑中央含一个抗体形成细胞，空斑数目即为抗体形成细胞数。
（三）NK细胞功能的测定
1．NK细胞计数 自然杀伤细胞（nature killer cell，NK cell）是参与固有免疫应答的重要细胞，在早期识别、杀伤肿瘤细胞中具有重要作用。目前多以CD3-、CD16＋、CD56＋作为NK细胞的典型标志。临床上常采用三色荧光标记单克隆抗体（抗CD3、抗CD16和抗CD56）标记NK细胞，通过流式细胞仪进行三参数分析。健康成人外周血NK细胞占淋巴细胞总数的8%～15%。
2．NK细胞的细胞毒试验 NK细胞具有细胞毒作用，能直接杀伤靶细胞。通过细胞毒试验可测定人NK细胞的细胞毒活性，具体方法与CTL的细胞毒试验类似。测定人NK细胞活性以K562细胞株作为靶细胞，而测定小鼠NK细胞活性常采用YAC-1细胞株作为靶细胞。
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