邻甲苯胺法测定血糖的含量

实验十　邻甲苯胺法测定血糖的含量

【实验目的】

学习和掌握利用邻甲苯胺法测定血液中葡萄糖含量的方法和原理。

【实验原理】

血液中所含的葡萄糖称为血糖。血糖是糖在体内的运输形式。目前国内医院多采用葡萄糖氧化酶法和邻甲苯胺法测定血糖。前者特异性强、价廉、方法简单，其正常值:空腹全血为3．6～5．3 mmol/L，血浆为3．9～6．1 mmol/L。后者由于血中绝大部分非糖物质及抗凝剂中的氧化物同时被沉淀下来，因而不易出现假性过高或过低，结果较可靠，其正常值:空腹全血为3．3～5．6 mmol/L，血浆为3．9～6．4 mmol/L。本实验采用邻甲苯胺法测定血糖。其原理是葡萄糖在酸性介质中加热脱水反应生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，分子中的醛基与邻甲苯胺缩合成青色的薛夫氏碱，通过比色可以定量测定。

【实验材料】

人血清。

【实验器材】

具塞试管1．5×15cm(×8)、分光光度计。

【药品试剂】

1．邻甲苯胺试剂:称取硫脲1．5 g溶于750 ml冰醋酸中，加邻甲苯胺150 ml及饱和硼酸40 ml，混匀后加冰醋酸至1000 ml，置棕色瓶中，冰箱保存。

2．葡萄糖标准溶液:5 mg/ml，临用时稀释成1 mg/ml。

【实验方法】

1．制作标准曲线:取6支试管编号后，按表1-4顺序加入试剂。加毕，温和混匀，于沸水浴中煮沸4分钟取下，冷却，放置30分钟，用1cm比色杯，试剂空白为参比，测定630 nm处吸光值，绘制标准曲线。

表1-4　　　　　　　　葡萄糖标准曲线的制备

2．样品测定:取3支试管编号后，按照表1-5所示分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定。加毕，温和混匀，于沸水浴中煮沸4分钟取下，冷却，放置30分钟，用1 cm比色杯，试剂空白为参比，测定630 nm处吸光值，从标准曲线中可查出样品中血糖的含量。

表1-5　　　　　　　　血清中葡萄糖含量的测定

【注意事项】

邻苯甲胺法测定血糖具有操作简单，特异性较高的优点，试剂成本也较低，但该法一般在浓酸高温条件下进行反应，且组成单一试剂的某些有机化合物具有一定毒性，对健康不利，又易损仪器，这是该法的缺点，因此在用该法做血糖测定时须注意安全。

【思考题】

1．制备样品时应注意什么?

2．血糖的检测为什么要空腹采血?