实验十七 血清葡萄糖测定(GOD-PAP终点比色法)
一、实验目的与要求
1.了解血清葡萄糖测定(glucose)在人体营养学上的意义及其在生理学上的重要性。
2.掌握血清葡萄糖测定方法及721分光光度计或半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。
二、实验原理
三、实验仪器与试剂
1.仪器
(1)AT-648半自动生化分析仪1台;
(2)四孔恒温水浴锅1个;
(3)振动摇床1台。
2.分组及仪器 2人一组,每组仪器包括:
(1)试管架1个;
(2)2ml试管10个;
(3)20μl微量加样器1个;
(4)1ml移液管1个;
(5)5ml移液管2个;
(6)洗耳球1个;
(7)搪瓷盘1个;
(8)微量加样滴头;
(9)吸水纸。
3.本试剂盒内含3种试剂:
(1)酶试剂 2×90ml
(2)苯酚溶液 1×20ml
(3)葡萄糖标准液 2×2ml(100mg/dl=5.55mmol/L)
四、实验步骤
1.用蒸馏水将1%苯酚溶液稀释至0.1%,将0.1%苯酚溶液与等量酶试剂混合成酶工作液。
2.按下表加入各溶液:
表17-1 系列反应管所加溶液
3.将各管分别摇匀,置37℃水浴中保温20min。
4.以空白管校正零点,进行比色(505nm)。
五、实验结果与分析
自动分析仪参数:样品10μl,酶酚混合液1.5ml,37℃保温20min,波长505nm。样品与试剂的用量可根据自动分析仪的型号不同而变动,但其比例不变。
线性范围:400mg/dl内线性良好。
六、实验报告
参照《营养学》、《生物化学》原理分析。
七、注意事项
1.试剂为空白对照;
2.每组样品做2~3个平行。
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