葡萄糖试剂中葡萄糖的含量测定

1.原理

糖与硫酸反应，脱水生成羧甲基呋喃甲醛，再与蒽酮缩合成蓝色络合物。其颜色深浅在一定范围内与糖浓度成正比。单糖、双糖、糊精、淀粉等均与蒽酮反应。因此，如测定不需要包括糊精、淀粉等糖类时，需将它们除去后测定。本法在20～200mg/L含量范围内呈良好的线性关系。

2.试剂

①蒽酮试剂: 称取0.2g蒽酮和1g硫脲(阻氧化剂)于烧杯中，缓慢加入100m L浓硫酸，边加边搅拌，溶解后呈黄色透明溶液。贮于冰箱中可保存2周。最好现用现配。

②葡萄糖标准溶液: 先配成1g/L的葡萄糖溶液。再配成10mg/L，20mg/L，40mg/L， 60mg/L，80mg/L，100mg/L的系列标准溶液。

3.操作步骤

吸取样品溶液1m L(含糖20～80mg/L)、葡萄糖系列标准溶液和蒸馏水(作空白)各1 m L，分别置于8根试管中，沿壁各加5m L冷的蒽酮溶液，混匀后，在试管口盖上玻璃球，在沸水浴上加热10min后，在流水中冷却20min，在620nm波长处以试剂空白作参比，测定吸光度。以葡萄糖标准系列溶液所测得的数据作标准曲线，从中查出样品溶液中葡萄糖的含量。

4.结果计算

式中: m1———标准曲线上查出的样品溶液中葡萄糖含量，μg;

m2——试样的质量，g;

V1——试液的定容体积，m L;

V2——测定时吸取试液的体积，m L。

5.说明与注意事项

①该法按操作的不同可分为几种，主要差别在于蒽酮试剂中硫酸的浓度(66%～95%)、取样样液(1～5m L)、蒽酮试剂用量(5～20m L)、沸水浴中反应时间(6～15min)和显色时间(10～30min)。这几个测定条件之间是有联系的，不能随意更改其中任意一个，否则将影响分析结果。

②蒽酮试剂不稳定，易被氧化，放置数天后变为褐色，故应当天配制，添加稳定剂硫脲后，在冷暗处可保存48h。

③反应温度、显色时间等都将影响显色状况，操作稍不留心，就会引起误差。样液必须清澈透明，加热后不应有蛋白质沉淀。如样液色泽较深，可用活性碳脱色。

④若样品中蛋白质、色素含量较高，干扰测定时，可用醋酸钡做沉淀剂除去干扰物。