实验二十一 酸化血清溶血试验
Acidified‐serum hemolysis test
一、实验目的
掌握酸化血清溶血试验的原理、操作方法及临床意义。
二、实验原理
本实验又称为Ham实验。正常人红细胞在酸化的自身新鲜血清中（内含补体），经37℃温育不会发生溶血。阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）患者的红细胞膜上的糖化磷脂肌醇锚磷脂合成障碍，对补体敏感，在用稀盐酸酸化的正常人血清中，经孵育后可出现溶血现象，因此可作为PNH的诊断依据。部分遗传性球形红细胞增多症和自身免疫性溶血性贫血的病人，本试验也可呈阳性反应。
三、实验器材
四、实验试剂
9g／L NaCl溶液； 0.2mmol／L盐酸溶液。
五、实验方法
1.50％红细胞悬液制备：分别取健康人（与病人同型或AB血型）和病人静脉血3ml置于离心管中，用玻璃珠搅动脱去纤维蛋白。用3倍量的9g／L NaCl溶液洗涤2次，用9g／L NaCl溶液配制成50％红细胞悬液。分别用于测定与做正常对照。
2.含补体的正常人血清制备：取与病人同型或AB血型3～5ml，37℃水浴凝固后分离血清备用。
3.不含补体的正常人血清制备：取上述血清56℃，30min灭活补体后备用。
4.操作：准备3支试管，按表3‐5加入试剂，放置水浴，轻混匀，塞紧管口，37℃水浴1h后观察结果。
表3‐5 酸化溶血试验的操作方法
六、注意事项
1.防止二氧化碳溢出：试验中试管必须塞紧或者加入少量液状石蜡。
2.应用脱纤维蛋白血：抗凝剂多为钠、钾盐，容易影响pH。
3.防止血型干扰：本试验正常人50％红细胞悬液必须用O型血。
七、结果判断
测定管溶血，对照管均不溶血为阳性；测定管不溶血，对照管均不溶血为阴性。
八、结果报告
观察各管是否溶血，并记录测定管及各对照管结果。
九、参考范围
正常人：阴性。
十、临床意义
1.酸溶血试验特异性高，为诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）的主要依据，但阴性并不能排除PNH的可能，约占30％以上。根据有缺陷的红细胞膜对补体敏感性的不同，可将PNH分为三型：补体敏感型、补体中度敏感型及补体不敏感型。补体敏感型者，酸溶血试验强阳性；补体中度敏感型者为弱阳性；补体不敏感型者，为阴性。
2.遗传性球形红细胞增多症和遗传性椭圆形红细胞增多症时，亦有部分患者本试验可呈阳性。
（沈 颖）
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