一、初步活性的测定
初步活性测定的目的是要判别供试植物样品有无“杀鼠”活性。以小白鼠为例,通常采用下述两种方法进行。
1.饲料混毒法
饲料混毒法的基本原理是将待测样品和试鼠人工饲料混合(一般设10%、15%和20%三个含量),以该混毒的样品直接饲喂试鼠3d,观察试鼠的反应症状及死亡情况,根据实验结果计算出校正死亡率,并判断该样品的杀鼠活性。
试鼠死亡率表示在试验过程中实验组试鼠的死亡情况,它反映了含样品的饵料对试鼠总的毒杀情况,但它不能排除试验过程中的误差,既在试验过程中由于自然因素引起试鼠的死亡情况,对照组死亡率即表示自然因素引起的试鼠死亡率,采用校正死亡率表示的试验结果可以排除由于自然因素造成的试验误差。一般认为,如果对照组的死亡率小于10%,则实验组死亡率和校正死亡率相差不大,可以不予校正;如果对照组的死亡率大于10%,则应校正;如果对照组死亡率大于20%,则在找出原因后(往往是试鼠不合格,或实验室温度过高、过低而不符合要求)需重新进行测定。校正死亡率按下公式计算。
2.样品提取液灌胃法
样品提取液灌胃法的基本原理是将待测样品用适当的溶剂提取后浓缩到一定浓度,按照不同的剂量,采用灌胃法一次性给药,然后正常喂养7d,观察试鼠的反应症状及死亡情况,根据结果判断该样品的杀鼠活性,并可根据试鼠的死亡率及剂量关系,计算出该样品对试鼠的半数致死量LD50。在采用该法进行样品的杀鼠活性测定时,必须注意溶剂本身对试鼠的毒性作用,如甲醇、乙醇等本身对试鼠就具有毒性,因此,实验中除设立空白对照实验外,还必须设立溶剂对照实验,以对实验的准确性进行校正,从而得出正确的结论。
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