诺瓦克样病毒

三、诺瓦克样病毒

诺瓦克病毒（Norwalk virus，NV）和诺瓦克样病毒（Norwalklike virus，NLV）是一组世界范围内引起的急性无菌性胃肠炎的重要病原。1972年，Kapikian等借助免疫电镜（IEM）技术对1968年在美国Norwalk镇暴发的一次急性胃肠炎进行研究，发现粪便中有一种直径约27 nm的小圆状结构病毒颗粒SRSV，并命名为NV。此后，世界各地陆续自胃肠炎患者粪便中分离出多种形态与之相似但抗原性略异的病毒样颗粒，均以发现地点命名。

诺瓦克样病毒具有许多共同特征：①直径26～35 nm的小圆结构病毒，无包膜；②分离自急性胃肠炎病人的粪便；③不能在细胞或组织中培养；④基因组为单股正链RNA；⑤在CsCl密度梯度中的浮力密度为1．36～1．41 g／cm³；⑥电镜下缺乏显著的形态学特征。此种病毒的主要传播途径是粪-口传播。原发场所有学校、家庭、旅游区、医院、食堂、军队等，食用被病毒污染的食物如牡蛎、冰、鸡蛋、色拉及水等最常引起暴发性胃肠炎流行。生吃贝类食物是导致诺瓦克样病毒胃肠炎暴发流行的最常见原因。

1．样品的处理

（1）粪便：采集临床粪便标本，置于缓冲液制成20％悬液，离心沉淀，加抗生素处理，上清液用于病毒分离。

（2）呕吐物：采集临床呕吐物标本，置于缓冲液制成20％悬液，离心沉淀，加抗生素处理，上清液用于病毒分离。

（3）血清：临床血清标本，急性期血在发病5天内采集，恢复期血在症状缓解后采集，离心取血清后加入PEG-6 000至10％，NaCl至2．3％，4℃沉淀过夜，第二天离心，沉淀储存备用。

2．常规分离鉴定技术

（1）免疫电镜（IEM）：将病人的粪便悬液与其恢复期血清或其他人的免疫血清孵育1小时后以35 000 r／min离心90分钟，沉淀溶于水中，用磷钨酸负染，电镜下可观察抗体在病毒表面形成一层绒毛状的膜。

（2）放射免疫（RIA）：可检测病毒颗粒，也可检测可溶性抗原，且较IEM敏感。可检测出急性期和恢复期之间抗体升高4倍以上，对流行病学调查更有意义。

（3）酶联免疫吸附试验（ELISA）：此法特异性强，灵敏度高，诊断迅速，且较经济，是目前可广泛应用的检测方法。由于NV培养未成功，原来用作试剂的病毒数量有限，现在分子生物学技术已经可以人工重组NV的衣壳蛋白，ELISA的发展不再受到粪便标本中病毒数量的影响。可检测与NV和MX抗原相关的病毒方法特异、敏感，但对非同一基因组的病毒不能检出。

（4）反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）：用来检测粪便或污染的贝类食物中的NV，但较EIA的敏感差，其优点是可进一步对病毒进行血清型和基因型的研究，不受到获得分型单克隆抗体的限制。

3．流行病学调查分型技术

（1）血清学分析：过去对NV感染的血清学流行病学调查采用免疫吸附血细胞凝集试验（IAHA）敏感性较低。近年来许多国家利用重组NV（rNV）衣壳蛋白和重组MX（rMX）衣壳蛋白制备的免疫血清作为抗原，以ELISA进行血清抗体调查。NV组病毒虽不是婴幼儿重症腹泻的重要原因，但是NV抗阳性率在儿童期的快速增长提示NV感染在儿童期还是相当常见的。无论是发达国家还是发展中国家，大多数成人都有NV抗体。

（2）分组分型技术：根据病毒RNA聚合酶区或衣壳蛋白区核酸和氨基酸的同源性比较，将HuCV分为3个基因组（genogroup）：基因Ⅰ组（代表株NV）、基因Ⅱ组（代表株SMA）和基因Ⅲ组（代表株Sapporo）。过去曾经用免疫电镜或固相免疫电镜等方法对病毒进行抗原分型，如在日本发现了9个不同型别的SRSV，在英国发现了UK1-4型，SMA和Hawaii病毒（HV）虽属同一基因组，但是血清型不同。由于以上分型所用的免疫血清来自人体，其敏感性和特异性不甚明了，而且来源有限，因此不能对NV样病毒进行统一分型。目前已经有了体外重组表达的NV，HV，Toronto virus（TV），Lordsdale virus（LV）衣壳蛋白，用来检测血清抗体反映，发现两个基因成员之间没有交叉反应，而同一基因组内不同的病毒感染后抗体反应却不。利用重组NV（rNV）衣壳蛋白和重组MX（rMX）衣壳蛋白制备的免疫血清，以免疫酶法检测粪便中的抗原，也证明有很好的组特异性。但MX免疫血清并不能检测出所有基因II组的病毒。NV组病毒的统一分型还有赖于更多NV样病毒的鉴定、基因组序列分析以及更多不同抗原特异性衣壳蛋白的表达和免疫血清的获得。