血浆清除率的测定

实验二　血浆清除率的测定

一、实验目的

1.理解测定血浆清除率的意义。

2.学习和掌握测定内生肌酐清除率的方法。

二、实验原理

血浆清除率是指两肾在单位时间（每分钟）内能将多少毫升血浆中所含某种物质完全清除出去，这个被完全清除了某物质的血浆毫升数就称为该物质的清除率（C），以公式表示，即C＝U·V/P。其中C为清除率（mL/min）；V为每分钟排尿量（mL）；U和P分别为测定的尿液和血浆的物质浓度。测定血浆清除率不仅可了解肾脏的功能状态，还可以测定肾小球滤过率、肾血流量和推测肾小管的转运功能。

单位时间内（每分钟）两肾生成的超滤液量称为肾小球滤过率（GFR）。肾小球滤过率（GFR）是反映肾小球滤过功能的客观指标。肌酐（creatinine）是肌肉中磷酸肌酸的代谢产物，健康人在安静状况下肌肉活动产生的肌酐量基本恒定，而且所产生的肌酐从肾小球滤过后，不被肾小管重吸收，近端小管仅分泌少量。因此，测定血清和尿液中肌酐浓度，并根据每分钟尿量，可以计算出体内肌酐的清除率，又称内生肌酐清除率（creatinine clearance，Ccr），可较好地反映肾小球的滤过功能，在临床上最为常用。

三、实验对象

家兔。

四、实验器材

兔手术台、哺乳动物手术器械一套、滴管、刻度移液管、输液器、动脉插管、气管插管、输尿管插管、5mL和10mL注射器、试管及试管架、水浴锅、721型分光光度计、小烧杯、量筒、废物缸。

五、实验药品

20%氨基甲酸乙酯溶液、生理盐水、1.0%肝素溶液、4%NaOH溶液、肌酐标准应用液、蒸馏水、饱和苦味酸溶液。

六、实验步骤和观察项目

1.手术准备部分

（1）家兔抓取、称重、麻醉及固定 抓取家兔，称重后，从耳缘静脉用20%氨基甲酸乙酯溶液（按5mL/kg体重）麻醉家兔，麻醉成功后，将家兔固定于兔手术台上备用。

（2）颈部手术 将颈部手术区备皮后，沿颈部正中纵向切开皮肤5～7cm，用止血钳钝性分离皮下组织及肌肉，暴露并游离气管2～3cm，在气管下穿线备用，并游离左侧颈总动脉和右侧的颈外静脉2～3cm，在其下各穿两根线备用。

1）气管插管 在甲状软骨下1～2cm处的气管两软骨环之间做一宽度为气管周径1/3～1/2的横切口，再向头部方向做一纵向切口，使切口呈现倒“T”形，将气管插管斜面向下沿切口朝向肺脏方向插入气管，用备用线结扎固定，并在气管插管的分叉处做二次固定。

2）动脉插管 用备用线结扎左侧颈总动脉的远心端，再用动脉夹夹闭其近心端，结扎线与动脉夹之间相距至少2cm，用眼科剪在结扎线的下方靠近结扎线的地方剪尖朝向心脏的方向呈45°角剪一小口，然后用事先充满肝素的动脉插管从剪口处朝向心脏的方向插入，用另一备用线结扎固定，并用线的残端做二次固定。

3）静脉插管 用动脉夹夹闭颈外静脉的近心端，再用备用线结扎其远心端，然后用眼科剪在结扎线的下方靠近结扎线的地方剪尖朝向心脏的方向呈45°角剪一斜口，将静脉插管沿剪口朝向心脏的方向插入静脉，并缓慢输入生理盐水（60～80滴/min为宜）。颈部手术完成后，用38℃生理盐水纱布覆盖手术野。

（3）腹部手术 腹部手术区备皮，在耻骨联合上约1cm处向上沿腹部正中线在皮肤上做一个长约4cm的纵向切口，沿腹白线打开腹腔，暴露膀胱，轻压切口两侧腹壁，使膀胱轻轻滑出到腹壁外，用注射器刺入膀胱抽取尿液5mL备用。在膀胱底部认清并分离两侧输尿管2～3cm，在其下各穿两根线备用。将两侧输尿管在近膀胱处各用一备用线结扎，以阻断尿流。在结扎线的上方且靠近结扎线的地方用眼科剪剪尖朝向肾脏的方向呈45°角剪一斜口，将输尿管插管沿剪口朝向肾脏的方向分别插入两侧输尿管，用备用线结扎固定，并用线的残端做二次固定，此时可见尿液从输尿管插管中缓缓流出。手术完成后，用38℃生理盐水纱布覆盖手术野。

2.观察与测定部分

（1）尿生成速度 记录家兔1h生成的尿量，换算成mL/min。

（2）测定血、尿肌酐 用事先用肝素润湿过内壁的干净试管从动脉插管处取血3mL（舍去前几滴不用），3 000r/min离心20min，取上清液（血浆）备测血肌酐用。

表8－2－1　血浆中肌酐含量测定操作步骤

表8－2－2　尿液中肌酐含量测定操作步骤

取6支干净试管，按表8－2－1和表8－2－2所示步骤操作，将6支试管内的液体混匀，37℃水浴30min，再放入冷水中冷却1min，在520nm处，比色测定光密度后按下列算式计算血浆和尿液中的肌酐含量。

七、注意事项

1.各种溶液配制要准确。

2.煮沸和冷却的时间也要准确，否则会影响颜色反应，降低比色结果的可靠性。

3.所需试剂要在近期内配制，否则将可能影响检测结果。

八、思考题

1.测定血浆清除率有什么意义？

2.哪些物质的血浆清除率可以较准确地反映肾小球滤过率？

3.在本实验中静脉输入生理盐水的目的是什么？