消毒灭菌效果检测

（一）医疗器械消毒

【采样时间】　在灭菌处理后，存放有效期内采样。

【监测方法】　采用无菌检验。无菌检验是指检查经灭菌的敷料、缝线、一次性使用的医疗用品、无菌器械以及适合于无菌检查的其他品种是否无菌的一种方法。无菌检验应在洁净度为100级单向流空气区域内进行，应严格遵守无菌操作，避免微生物污染；对单向流空气区域及工作台面，必须进行洁净度验证。

【注意事项】

（1）送检时间不得超过6小时，若样品保存于0～4℃，则不得超过24小时。

（2）被采样本表面积＜100cm2取全部表面；被采样本表面积≥100cm2，取100cm2。

（3）若消毒因子为化学消毒剂，采样液中应加入相应中和剂。

（二）紫外线消毒

参照国家卫生部《消毒技术规范（2002版）和总后勤部卫生部标准《医院感染管理技术规范》有关规定执行。

【监测项目】

1．日常监测　包括灯管应用时间、照射累计时间和使用者签名。

2．紫外线灯管照射强度监测　使用中的紫外线灯管照射强度监测应每半年进行1次，灯管照射强度低于70μW／cm2应当更换；新灯管的照射强度，普通30W直管型紫外线灯不得低于90μW／cm2，30W高强度紫外线灯不得低于180μW／cm2。

3．生物监测　必要时进行。经照射消毒后的物品或空气中的自然菌减少率应在90．00%以上；人工染菌的杀灭率应达到99．90%。

【监测方法】

1．紫外线灯管辐照度值测定

（1）紫外线辐照计测定法：开启紫外线灯5分钟后，将测定波长为253．7nm的紫外线辐照计探头置于被检紫外线灯下垂直距离1m的中央处，待仪表稳定后，所示数据即为该紫外线灯管的辐照度值。

（2）紫外线强度照射指示卡监测法：开启紫外线灯5分钟后，将指示卡置紫外线灯下垂直距离1m处，有图案一面朝上，照射1分钟（紫外线照射后，图案正中光敏色块由乳白色变成不同程度的淡紫色），观察指示卡色块的颜色，将其与标准色块比较，读出照射强度。

（3）结果判定：普通30W直管型紫外线灯，新灯辐照强度≥90μW／cm2为合格；使用中紫外线灯辐照强度≥70μW／cm2为合格；30W高强度紫外线新灯的辐照强度≥180μW／cm2为合格。

（4）注意事项：测定时电压220V±5V，温度20～25℃，相对湿度＜60%，紫外线辐照计必须在计量部门检定的有效期内使用；指示卡应获得卫生许可批件，并在有效期内使用。

2．生物监测法

（1）空气消毒效果监测：监测按相关原则执行。

（2）表面消毒效果监测：监测按相关原则执行。

【注意事项】　紫外线消毒效果监测时，采样液（平板）中不加中和剂。

（三）手和皮肤黏膜消毒

【采样时间】　在消毒后立即采样。

【采样方法】

1．手部采样　被检人5指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面积约30cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。

2．皮肤黏膜采样　用5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检皮肤处，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液的试管内，立即送检。不规则的黏膜皮肤处可用棉拭子直接涂擦采样。

【监测方法】

1．细菌总数检测　将采样管在混匀器上振荡20秒或用力振打80次，用无菌吸管吸取1．0ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已熔化的45～48℃的营养琼脂15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±1℃温箱培养48小时，计数菌落数。

采样结果计算方法：

2．致病菌检测　参见本书相关章节。

【结果判定】

1．洗手效果

（1）Ⅰ、Ⅱ类区域工作人员：细菌总数≤5cfu／cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌为消毒合格。

（2）Ⅲ类区域工作人员：细菌总数≤10cfu／cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌为消毒合格。

（3）Ⅳ类区域工作人员：细菌总数≤15cfu／cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌为消毒合格。

（4）母婴同室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的工作人员手上，不得检出沙门菌、大肠埃希菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌为消毒合格。

2．皮肤黏膜消毒效果　参照手的卫生学标准执行。

【注意事项】　皮肤黏膜采样处，若表面不足5cm×5cm可用相应面积的规格板采样。

（四）物品和环境表面消毒

【采样时间】　在消毒处理后进行采样。

【采样方法】

（1）用5cm×5cm的标准采样灭菌规格板，放在被检物体表面，采样面积≥100cm2，连续采样4个，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。

（2）门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。

【监测方法】

1．细菌总数检测　按相关原则执行。小型物体表面的结果计算，用cfu／件表示。

2．致病菌检测　按相关原则执行。

【结果判定】

（1）Ⅰ、Ⅱ类区域细菌总数≤5cfu／cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

（2）Ⅲ类区域细菌：总数≤10cfu／cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

（3）Ⅳ类区域细菌：总数≤15cfu／cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

（4）母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门菌。

（五）空气消毒效果

【采样时间】　在消毒处理后、操作前进行采样。

【采样方法】　采用平板暴露法。

1．布点方法　室内面积≤30m2，设内、中、外对角线3点，内、外点布点部位距墙壁1m处；室内面积＞30m2，设4角及中央5点，4角的布点部位距墙壁1m处。

2．取样送检　将普通营养琼脂平板（直径为9cm）放在室内各采样点处，采样高度为距地面1．5m，采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5分钟，盖好立即送检。

【监测方法】　按照相关要求进行。平板暴露法结果计算公式：

细菌总数（cfu／m3）＝50　000N／（A×T）

式中：A为平板面积（cm2）；T为平板暴露时间（分钟）；N为平均菌落数（cfu）。

【结果判定】

（1）Ⅰ类区域：细菌总数≤10cfu／m3（或0．2cfu／平板），未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格。

（2）Ⅱ类区域：细菌总数≤200cfu／m3（或4cfu／平板），未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格。

（3）Ⅲ类区域：细菌总数≤500cfu／m3（或10cfu／平板），未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格。

【注意事项】　采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静置10分钟进行采样。

（六）消毒液染菌量

【监测方法】

1．涂抹法　用无菌吸管吸取消毒液1．0ml，加入9．0ml含有相应中和剂的采样管内混匀，用无菌吸管吸取上述溶液0．2ml，滴于干燥普通琼脂平板，每份样品同时做2个平行样，一平板置20℃培养7天，观察真菌生长情况，另一个平板置35℃温箱培养72小时计数菌落数，同时按相关原则检测致病菌。消毒液染菌量（cfu／ml）＝每个平板上的菌落数×50

2．倾注法　用无菌吸管吸取消毒液1．0ml，加入到9．0ml含相应中和剂的无菌生理盐水采样管中混匀，分别取0．5ml放入2只灭菌平皿内，加入已熔化的45～48℃的营养琼脂15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，一平板置20℃培养7天，观察真菌生长情况；另一个平板置36℃±1℃培养72小时，计数菌落数，同时按相关原则检测致病菌。

消毒液染菌量（cfu／ml）＝每个平板上的菌落数×20

【结果判定】　消毒液染菌量≤100cfu／ml，并未检出致病菌为合格。【注意事项】　采样后1小时内检测。