免疫学分型检测

应用单克隆抗体（McAb）可以更精细地分析正常细胞与恶性细胞的免疫表型，准确地鉴别正常不成熟白细胞和白血病细胞，划分细胞的发育阶段。在下列情况下，免疫学分型将更为重要：①形态学和细胞化学染色不能确定白血病细胞系列；②急性髓淋混合白血病；③形态上为ALL，但缺乏淋系特异的细胞抗原表达；④白血病细胞表面抗原已发生改变而形态学尚未见改变时。

经典的白血病免疫分型方法为流式细胞分析法。原理：将被检测细胞用荧光标记抗体结合后输入流式细胞仪，通过高速流动系统将细胞排列成行，一个一个地流经检测区，当细胞从流动室喷嘴处流出时，超声震荡搅动流液，使流液断裂成一连串的小滴（4000／s），其中仅千分之几的液滴中含有细胞，每滴液内最多只含一个细胞，细胞经光束照射产生荧光和散射光，由光电倍增管接收，转化成脉冲信号，数据经电脑处理，分辨细胞的类型，从而检测出各类细胞。

CD45是白细胞的共同抗原成分，所有人类白细胞均表达CD45，包括淋巴细胞、单核细胞、多形核细胞、嗜酸和嗜碱性粒细胞、胸腺细胞、脾细胞、扁桃体细胞以及骨髓前体细胞。造血系统细胞CD45表达量与细胞分化程度的高低紧密相关，即分化程度高的细胞CD45表达量高，分化程度低的细胞CD45表达量低（淋巴细胞＞单核细胞＞成熟粒细胞＞原幼细胞），在红细胞中不表达；SSC是侧向角参数，反应细胞的颗粒度（成熟粒细胞＞单核细胞＞原幼细胞＞淋巴细胞）。目前，国际上采用CD45－SSC设门（Gating），可非常轻松地将白血病细胞与正常细胞分开，增加白血病免疫分型的准确性用CD45－SSC设门寻找异常细胞，将细胞分为5个群体，当幼稚细胞达70%～80%时，可大致估计AL的类型。骨髓成分复杂，各种大小和分化程度的细胞均有，若不用CD45－SSC设门，检测到的阳性细胞的百分率是以总细胞为分母来计算，当时以阳性细胞＞20%为界线，现在以CD45－SSC设门，排除了正常细胞的干扰，阳性细胞的百分率是以幼稚细胞为分母，因此再以阳性细胞＞20%为界线则不太合适了，所以，用CD45－SSC设门寻找异常细胞时，定性比定量更重要。

白血病免疫分型需要一组单克隆抗体，要选用细胞系列相关好以及细胞分化过程中出现较早的，如AML可选用髓系单克隆抗体CD33、CD13、CD15、CD14；对T－ALL有CD2、CD3、CD4、CD7、CD8；对B－ALL有CD10、CD19、CD20、CD22；对红系细胞有血型蛋白A（GPA）；对巨核细胞系则为CD41、CD42等。没有一种表面抗原是白血病细胞所特有的，只是反映分化阶段及系列特异性，正常细胞有的白血病细胞也有，因此，免疫表型不能单独用于诊断白血病，必须结合形态学检查来确定诊断。

ALL可分为B－ALL和T－ALL　2大类。B－ALL再分4型，T－ALL分为3型（表3－1、表3－2）。

表3－1　B－ALL免疫分型

表3－2　T－ALL免疫分型

在ALL患者中，普通B－ALL（C－ALL）占76%，T－ALL占12%，未分化的ALL（NuLL－ALL）占12%，成熟B－ALL＜1%。其中，C－ALL预后较好，T－ALL及成熟B－ALL预后较差。ALL复发时，可有免疫表型的改变，如CD10、TdT的丢失。

AML的免疫分型：近年来发现不少与AML相关的McAb，但是AML免疫分型进展缓慢。目前McAb只用于区别AML与ALL和肯定AML的诊断，大约93%的AML表达CD13和（或）CD33，ALL几乎不同时表达这2种抗原。但到目前为止，除M4／M5表达CD14，M3缺HLA－DR抗原，人们尚未发现与FAB分型M1～M5有明确相关性的免疫学标志。因此，借免疫学标志来区别AML的亚型尚有困难。

FAB不能分类的急性白血病是近年来开展免疫表型检查后逐渐被人们所认识的一类急性白血病，它包括3种类型：即急性未分化型白血病（AUL）、急性混合白血病（MAL）和过氧化物酶阴性的AML［pox（－）－AML］。

（1）AUL：无粒或淋巴细胞的形态表现，细胞化学染色及免疫表型检测为阴性，预后不佳，多为HLA－DR（＋），部分有CD9（＋）。Raghavaolar等报道9例中7例有B细胞表型。

（2）MAL：2%的儿童患者中白血病细胞可同时表达淋系、粒系抗原，这类白血病称为MAL，有双表型、双系列、双克隆的可能。婴儿发病率高，预后差。1992年，Catovsky拟定标准，这种白血病可能起源于更早的既能向淋系又能向粒系分化的细胞。

MAL应用单克隆抗体诊断须慎重，首先要排除相关抗原的交叉表达和可结晶片段受体（FcR）造成非特异结合，因为细胞在恶变过程中基因的异常表达常可导致标记表达的混乱。有学者认为，在采用单免疫标志测定发现有2个系列抗原表达时，称为异常抗原表达，较MAL更为客观。对MAL的诊断需要综合形态学包括超微结构、遗传学、分子生物学多方面检测判断为妥。