猫爪草中含有较多糖，采用硫酸－蒽酮比色法，以葡萄糖为观测指标测定，对猫爪草中总糖和多糖含量测定方法进行了系统研究。通过显色反应条件试验，确定了显色剂用量、反应温度、反应时间，建立了相对比较稳定的显色反应方法。研究中分别就提取方法、提取条件及多糖沉淀条件等进行了试验，建立了测定总糖和多糖含量的方法，并进行了方法学考察，方法简便，有可操作性。以建立的方法测定了不同产地、野生、种植产品的总糖和多糖的含量，结果表明，本法操作简便，重现性好，符合含量测定要求，可考虑作为控制猫爪草药材质量的分析方法。
1．实验材料
（1）仪器：岛津2401紫外可见分光光度计，752紫外光栅分光光度计。
（2）试药：葡萄糖、乙醇（AR）、硫酸（AR）、蒽酮（AR）。药材为毛茛科植物小毛（茛Ranunculus ternatus Thunb．）的干燥块根。药材来源见表2－1。
表2－1 药材来源
2．方法
（1）溶液配制
①对照品溶液：精密称取干燥至恒重的葡萄糖对照品（C6H12O6·H2O）0．1164g于100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀得对照品储备液（Ⅰ）。
②供试品溶液的制备：a．总糖溶液。取药材粉末（60目）0．25g，精密称定，于150ml烧瓶中，精密加入50ml蒸馏水，称重，回流提取60min，冷却，称重，补足重量，过滤，弃5ml前滤液，精密吸取续滤液1．0ml于25ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，即得。b．多糖溶液：精密量取续滤液5．0ml于50ml小烧杯中，水浴上挥干后，加入1ml蒸馏水溶解，加10ml无水乙醇，静置30min，过滤，将沉淀全部转移至滤纸中，用蒸馏水－无水乙醇（1∶10）的溶液充分洗涤沉淀后，将带滤纸的漏斗移至25ml的容量瓶上，分批用蒸馏水将沉淀完全溶入容量瓶中，用蒸馏水定容，即得。
（2）测定波长的选择：将溶液显色，在波长400～800nm间进行光谱扫描，结果对照品和供试品均在波长624～626nm间有最大吸收，因此，选择625nm作为测定波长。
（3）测定方法：精密量取供试品溶液试液1．0ml于10ml具塞试管，置冰水浴中，显色剂4．0ml，在沸水浴中显色反应10min后，取出置冰水浴中10min，室温放置10min，同时量取蒸馏水1．0ml，同法操作，作参比溶液，按《中国药典》2010版一部附录ⅤA紫外－可见分光光度法，在625nm处测定吸光度。
（4）方法学考察
①标准曲线及线性范围精密吸取储备液（Ⅰ）1．0ml，2．0ml，3．0ml，4．0ml，5．0ml，6．0ml分别于100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀得对照品溶液B1，B2，B3，B4，B5，B6。分别精密量取各对照品溶液1．0ml，以（1）项下的方法进行操作，得回归方程为：A＝10．964C－0．031 3，r＝0．999 7，线性范围10．58～63．49μg／ml。
②精密度、重复性、稳定性试验：取B3溶液连续重复测定吸光度6次，计算得RSD为0．35%，表明仪器性能良好。取药材（批号6）粉末6份，重复6份，所得含量的RSD分别为1．35%，符合方法要求。对其中的一份溶液在5h内测定吸光度，稳定性试验结果：RSD为1．06%，显色溶液稳定。
③加样回收率试验：取药材（批号：6，总糖含量21．10%）粉末0．12g，精密称定，置150ml烧瓶中，共6份，分别1．040mg／ml的葡萄糖对照品溶液（C6H12O6·H2O）0．286 0g于250ml容量瓶）25ml，蒸馏水25ml，按（2）项下的方法操作，测定总糖的含量，以总糖计算回收率。回收率分别为102．02%，98．12%，99．09%，103．65%，96．39%，97．16%。平均回收率为99．41%。
3．结果 以建立的分析方法测定6份不同产地的药材样品总糖与多糖的含量，结果显示，不同产地的药材样品总糖与多糖的含量差异较大，见表2－2。
表2－2 样品含量测定（n＝3）
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