超高效液相色谱的特点

与普通HPLC相比，超高效液相色谱技术以小颗粒填料为基础，不仅大大提高了色谱柱的柱效，还具有超过分离度、超高分析速度、超高灵敏度等优势。

4.4.2.1　超高分离度

根据等度液相色谱分离的分离度(Rs)方程，分离度(Rs)与柱效(N)的平方根成正比。

按Van Deemter色谱理论，柱效(N)与颗粒度(dp)成反比。

因此，随着dp的降低，N值会增加;而N值增加，则Rs值增加。HPLC与超高效液相色谱的基本分离理论，进一步说明了颗粒度大小和分离度密不可分的关系。超高效液相色谱系统一般采用1.7μm颗粒填料提供柱效，相比于比5μm颗粒填料，柱效提高了3倍。因为分离度与粒度的平方根成反比，1.7μm颗粒的分离度比5μm颗粒提高了70%。在梯度分离中也具有同样的优越性，此时分离能力用峰容量衡量。由于分离能力的提高，采用超高效液相色谱技术可分离出更多的色谱峰，从而使得样品提供的信息达到新的水平，极大地提高了对复杂生物样品的分离分析能力。

4.4.2.2　超高速度

较小的颗粒能提高分析速度而不降低分离度。因为颗粒度减小后，柱长可以按比例缩短而保持柱效不变，而且Van Deemter理论表明最佳流速与粒度成反比。柱长缩短会加快分离速度，而颗粒度越小，最佳流速也越大，进而可以通过提高流速来进一步加快分离速度。采用1.7μm颗粒填料时，柱长可以比用5μm颗粒填料时缩短3倍而保持柱效不变，而且使分离在高3倍的流速下进行，结果使分离过程快了9倍而分离度保持不变。

4.4.2.3　超高灵敏度

超高效液相色谱使用小颗粒技术可以得到更高的柱效(因而改善了分离度)及更窄的色谱峰宽。因为色谱峰变得更窄，峰高也就更高了。同样，当超高效液相色谱法用于快速分析、用较短色谱柱而使柱效不变时，色谱峰高会相应增加。因此，使用超高效液相色谱技术，不仅可以在保持与HPLC相同分离度时提高峰高，而且在改善分离度的同时亦可提高峰高即灵敏度。

4.4.2.4　与质谱联用提高离子化效率减小基质效应

由于低流速下色谱峰扩散不大，增加了峰浓度，有利于提高离子源的效率，因而使灵敏度至少提高了3倍。除超高效液相色谱本身带来的速度、灵敏度和分离度的改善外，其超强分离能力有助于待测物与同其竞争电离的杂质的分离，从而可以使质谱检测器的灵敏度因离子抑制现象的减弱或克服而得到进一步的提高，同时有助于待分析组分与基质杂质的分离，在一定程度上降低了基质效应。故使用UPLC－MS联用，可以获得灵敏度较HPLC－MS联用系统大有改善的分离结果，获得更多、质量更好的信息。