苯系物的高效液相色谱分析

实验25　苯系物的高效液相色谱分析

实验目的

(1)初步掌握高效液相色谱法的基本原理和实验方法;

(2)理解反相色谱的优点及应用。

实验原理

在液相色谱中，若采用非极性固定相(如十八烷基键合相)和极性流动相，这种色谱法称为反相色谱法。这种分离方式特别适合于同系物、苯系物等的分离。它们在ODS柱上的作用力大小不等，它们的分配比不等，在柱内的移动速率不同，因而按先后顺序流出柱子。根据组分峰面积大小及测得的定量校正因子，就可由归一化定量方法求出各组分的质量分数。归一化定量公式为

式中:A_i为组分的峰面积，f'_i为组分的相对定量校正因子。采用归一化法的条件是:样品中所有组分都要流出色谱柱，并能给出信号。此法简便、准确，对进样量的要求不十分严格。

仪器和药品

仪器:具备紫外检测器的高效液相色谱仪、C18色谱柱、色谱进样器、容量瓶。

药品:甲苯、萘、联苯、甲醇(均为分析纯)、二次重蒸水(或高纯水)。

实验步骤

1．实验条件

按操作说明书使色谱仪正常运行，参考实验条件如下。

柱温:室温。流动相:甲醇∶水=88∶12。流量:1.0mL·min^－1。紫外检测器工作波长:254nm。

2．标准溶液配制

准确称取甲苯0.01g，萘0.08g，联苯0.02g，用重蒸馏的甲醇溶解，并转移至50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。

3．测定

当基线平直后，用进样器注入标准溶液3.0μL^①，记下各组分保留时间。再分别注入样品各组分对应的纯物质3.0μL，记下保留时间。重复3次。

4．结果处理

确定未知样中各组分的出峰次序;求出各组分的相对定量校正因子;求出样品中各组分的质量分数。

注释

①用微量注射器吸液时，要防止气泡吸入。

思考题

(1)流动相在使用前要经过哪些处理?

(2)说明紫外吸收检测器的工作原理。