高效液相色谱柱效能的评定

一、 实验目的

（1） 了解高效液相色谱仪的基本结构。

（2） 初步掌握高效液相色谱仪的基本操作方法。

（3） 学习高效液相色谱柱效能的评定及分离度的测定方法。

二、 实验原理

组分在液体中的扩散系数只有在气体中的1／105～1／106，因此在范德华方程中的分子扩散项对理论塔板高度的贡献很小， 而影响理论塔板高度的主要因素是涡流扩散项和传质阻力项。 只要采用粒径为数微米， 且填充紧密、 均匀， 一定能获得较高的柱效。

苯、 萘、 联苯分子非极性部分的总表面积不同， 缔合能力不同， 其保留时间也不同。 通过计算色谱峰的理论塔板数以及各个化学物质间的分离度可评价色谱柱的效能。

三、 仪器与试剂

1. 仪器

（1） 高效液相色谱仪（带自动进样器， 或配置微量进样器）；

（2） 分析天平；

（3） 容量瓶；

（4） 微量进样器。

2. 试剂

（1） 苯、 萘、 联苯（均为分析纯）；

（2） 甲醇（色谱纯）；

（3） 纯净水。

四、 实验步骤

1. 色谱条件

色谱柱： C18，4.6mm×150mm，5μm；

流动相： 甲醇-水 （80∶20， v／v）；

流速：1m L·min-1；

检测波长：254nm；

柱温：30℃；

进样量：10μL。

2. 操作步骤

分别精密配制含苯、萘、联苯浓度均为约1mg·m L-1的3份对照品溶液各10m L。

分别精密吸取上述对照品溶液各2m L置于10m L容量瓶中， 加流动相稀释， 并定容至刻度， 摇匀， 得到含苯、 萘、 联苯的混合对照品溶液。

按照上述色谱条件操作， 进样， 记录色谱图。

计算各色谱峰的理论塔板数及各峰间分离度。

3. 实验数据处理

记录实验条件， 测试各试样后记录苯、 萘、 联苯的保留时间、 峰宽、 半峰宽， 计算出各物质对应的理论塔板数， 填写于表5-7中。 根据保留时间与峰宽信息， 计算相邻物质对间的分离度。

表5－7 实验获得的数据

分离度按式（5-15）计算。 柱效按式（5-16）计算。

思 考 题

1. 如何用实验方法判别色谱图上苯、 萘、 联苯的色谱峰归属？

2. 如何改变色谱条件， 以减小苯、 萘、 联苯的保留时间？

3. 若实验中的色谱峰无法完全分离， 应如何改变实验条件以获得改善？