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高效液相色谱仪操作规程

时间:2022-02-12 理论教育 版权反馈
【摘要】:开启Agilent1100液相色谱仪的真空脱气、四元泵、柱温箱、紫外检测器等各模板电源,再开启HPChemical Station主机电源,进入HP Chemical Station“OnLine”主界面。在Pressure LimitsMax处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子,单击OK进入下一画面。从Run Control菜单中选择Sample Info选项,输入操作者名称,在Data File中选择Manual或Prefix。先以100%水冲洗色谱柱20min,再换成100%甲醇冲洗10min,关闭Off Line工作站;置PumpControl为Off,柱图标为Off;关闭On Line工作站,从File菜单中选择Exit,回至Start界面,按Shut Down等待关机。

3.5.3 Agilent1100高效液相色谱操作规程

1.开机前的准备工作

(1)开机前的准备工作包括:选择、纯化和过滤流动相;检查贮液瓶中是否具有足够的流动相,吸液砂芯过滤器是否已可靠地插入贮液瓶底部;废液瓶是否已倒空,所有排液管道是否已妥善插在废液瓶中。

(2)开启Agilent1100液相色谱仪的真空脱气、四元泵、柱温箱、紫外检测器等各模板电源,再开启HPChemical Station主机电源,进入HP Chemical Station“OnLine”主界面。

(3)打开Purge阀,单击Pump图标,单击Setup选项,进入Pump编辑画面,设Flow为5mL·min-1,单击OK。单击Pump图标,单击Pump Control选项,选中On,单击OK,则系统开始执行Purge工作,直到所有要用通道无气泡为止。单击Pump图标,单击Setup选项,进入Pump编辑画面,设Flow为1.0mL·min-1,关闭Purge阀。

(4)单击泵下面的瓶图标,输入Actual Volume和Total Volume;也可输入阻止分析和关泵的体积,单击OK。

2.数据采集方法编辑

(1)从Method菜单中选择EditEntire Method项,选中除Data Analysis外的3项,单击OK,进入下一画面。

(2)在Method Comments中加入方法的信息(如方法的用途等),单击OK进入下一画面。

(3)在Flow处输入流量1mL·min-1,在SolventB处输入70.0(A=100-B),也可用In-sert键插入一行Timetable,编辑梯度淋洗。在Pressure LimitsMax处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子,单击OK进入下一画面。

(4)在Temperature下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击More>>键,选中Same asLeft使柱温的温度左右一致,单击OK进入下一画面。

(5)在Wavelength下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在PeakWidth(Response Time)下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间,如>0.1min。

(6)在Timetable中可以用Insert键插入一行,可以输入随时间切换的波长,如1min,波长=300nm,单击OK进入下一画面。

(7)从Run Control菜单中选择Sample Info选项,输入操作者名称,在Data File中选择Manual或Prefix。区别:Manual———每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。Prefix———在Prefix框中输入前缀,在Counter框中输入计数器的起始位。

(8)基线调节:待基线稳定后,按“Balance”键,使基线回至零点附近,准备进样。

(9)进样:将六通阀旋转至“Load”位置,用平头注射器进样后,转回至“Inject”位置,工作站上即出现竖直红线,计时开始,同时界面变成蓝色。

3.数据分析方法编辑

(1)从View菜单中,单击Data Analysis进入数据分析画面。从File菜单中选择Load Signal选项,选中你的数据文件名,单击OK。作谱图优化时,从Graphics菜单中选择Signal Options选项,再从Ranges中选择Auto Scale及合适的显示时间,单击OK,或选择Use Range调整,直到图的比例合适为止。

(2)积分:从Integration中选择Auto Integrate,如积分结果不理想,再从菜单中选择Integration Events选项,选择合适的Slope Sensitivity,Peak Width,Area Reject,Height Reject参数。从Integration菜单中选择integrate选项,则数据被积分。单击左边√图标,将积分参数存入方法。

(3)打印报告:从Report菜单中选择Specify Report选项,单击Quantitative Result框中Calculate右侧的黑三角,选中Percent(面积百分比),其他选项不变,单击OK。从Report菜单中选择Print Report,则报告结果将被打印到屏幕上,若想输出到打印机上,则单击Report底部的Print按钮。

4.关机程序

先以100%水冲洗色谱柱20min,再换成100%甲醇冲洗10min,关闭Off Line工作站;置PumpControl为Off,柱图标为Off;关闭On Line工作站,从File菜单中选择Exit,回至Start界面,按Shut Down等待关机。

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