【摘要】：蛋白质芯片又称蛋白质微阵列,是基因芯片后研发出的对基因功能产物表达检测的技术。该技术具有高通量、低成本和标准化的特点,尤其适用于蛋白表达的大规模、多种类筛查和蛋白质组学分析,且可用于感染因素筛查、疾病分子病理诊断及预警和药物开发等方面的研究。
(一)概述
蛋白质芯片又称蛋白质微阵列,是基因芯片后研发出的对基因功能产物表达检测的技术。该技术的基本原理为:在载体芯片上高密度、有序地点布多种蛋白质,用荧光标记的已知抗体或配体与待测样本的抗体或配体一起同芯片上的蛋白质竞争结合,再用荧光扫描仪测定芯片各点的荧光强度,经计算机分析量化待测样本的抗体或配体。随着材料科学和制作技术进步,目前一张芯片的最大检测容量已超过13 000点,整个检测过程也实现了自动化。该技术具有高通量、低成本和标准化的特点,尤其适用于蛋白表达的大规模、多种类筛查和蛋白质组学分析,且可用于感染因素筛查、疾病分子病理诊断及预警和药物开发等方面的研究。
(二)主要类型
蛋白质芯片根据制作方法和用途分为检测芯片与功能芯片;也可根据点布承载物种类分为抗体芯片、蛋白芯片、肽芯片、配体芯片与小分子芯片;根据点布承载物密度分为低密度蛋白质芯片与高密度蛋白质芯片;根据样本分为细胞溶解物蛋白质芯片、条件化培养基蛋白质芯片、血清蛋白质芯片与反相蛋白质芯片等。
(三)蛋白质芯片检测方法
检测吸附到芯片表面的靶蛋白主要有两种方式。一种是以质谱技术为基础的直接检测法,如表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术,其机制为:使吸附于芯片表面的靶蛋白离子化,并让离子在电场力作用下飞行,通过检测离子的飞行时间计算出质量电荷比,从而分析蛋白质分子质量和相对含量。另一种为蛋白质标记法,即预先用荧光物质或核素标记样品蛋白质,洗去没结合的蛋白质,用芯片扫描仪检测结合到芯片上蛋白质发出的特定信号,通过软件分析采集荧光位置、荧光强弱,获取所需生物信息。
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