糖化血红蛋白标本放置时间

一、概 述

血中葡萄糖与红细胞的血红蛋白相结合的产物,被称为糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin GHb,Hb A1c)。这是一个缓慢的、不可逆的非酶促反应,与血糖浓度和高血糖存在时间相关性,蛋白质与葡萄糖结合后可发生变性,造成多种器官的功能障碍,这是引起DM慢性并发症的一个原因。因此,它可为较长时间段的血糖浓度提供回顾性评估,而不受短期内血糖浓度波动的影响。

二、病人准备

1.药物 由于糖化血红蛋白是反应最近2～3个月的平均血糖值,所以药物的短期停用以及药物的暂时调整都不影响其测定结果。

2.饮食 告诉患者这项试验反应的是患者采血前2～3个月的平均血糖值,因此,采集标本时一次进食对其测定影响不大,病人不需空腹。

三、标本采集

1.采集时间 该试验标本不受采集时间以及采集状态的影响。采集静脉血2ml于乙二胺四乙酸(EDTA)、草酸盐和氟化物抗凝管中,摇匀后4h内送检。

2.标本保存 试验时需要用溶血素溶解,抗凝剂EDTA和氧化物不影响结果,肝素可使结果增高。

全血标本可于4℃储存1周,高于4℃时,Hb A1a和Hb A1b会随时间和温度上升,而 Hb A1c仅轻微变化。-70℃可保存18周以上,一般不推荐-20℃保存。标本置室温超过24h可使结果增高,因为长时间储存红细胞代谢产生血红蛋白相关的谷胱甘肽加合物,特别是在色谱法时会干扰试验。

四、注意事项

1.在尿毒症、高HbF及急性高血糖时产生可逆的醛亚胺(前Hb A1c),当用此法测定时,可引起假性高值。

2.Hb病以及因慢性或急性失血和溶血性疾病时,由于红细胞存活时间缩短,均可导致假性低值。

3.高脂血症的血样由于样本的浊度会使光度计测定产生错误,一般不用。

五、试验方法及正常参考范围

1.离子交换层析法 用偏酸缓冲剂处理Bio-Rex70阳离子交换树脂,使之带负电荷。它与带正电荷的Hb有亲和力。Hb A及Hb A1均带正电荷,由于Hb A1的两个β-链N-末端正电荷被糖基清除,正电荷较Hb A少,二者对树脂的附着力不同。用p H 6.7磷酸盐缓冲剂可首先将带正电荷较少、吸附力较弱的Hb A1洗脱下来,用分光光度计测定洗脱液中的Hb A1占总Hb的百分数。

正常参考范围 健康成年人Hb A1(%):均值6.5%;范围5.0%～8.0%。

2.Hb A1c免疫法 先加入样本缓冲液,样本中的糖化血红蛋白和抗Hb A1c抗体反应形成可溶性的抗原-抗体复合物,因为在Hb A1c分子上只有一个特异性的Hb A1c抗体结合位点,不能够形成凝集反应。然后,加入多聚半抗原缓冲液,多聚半抗原和反应液中过剩的抗Hb A1c抗体结合,生成不溶性的抗体-多聚半抗原复合物,可用比浊法进行测定。同时在另一个通道上测定Hb浓度。在该通道中,溶血液中的血红蛋白转变成具有特征性吸收光谱的血红蛋白衍生物,用重铬酸盐作标准参照物。进行比色法测定Hb浓度。根据Hb含量及Hb A1c含量,计算出Hb A1c%。

IFCC的Hb A1c正常参考范围 2.8%～3.8%

DCCT/NGSP的Hb A1c正常参考范围 4.8%～6.0%

3.亲和层析法 用于分离糖化与非糖化Hb的亲和层析凝胶柱,是交联间-氨基苯硼酸的琼脂糖珠。硼酸与结合在Hb分子上葡萄糖的顺位二醇基反应,形成可逆的五环化合物,致使样品中的糖化Hb选择性地结合于柱上,而非糖化Hb则被洗脱。然后用山梨醇解离五环化合物以洗脱糖化Hb,在415nm分别测定解析液的吸光度,计算糖化Hb的百分率。

正常参考范围 健康成年人Hb A1c平均6.5%,范围5.0%～8.0%。

六、临床意义

1.此试验用于评价糖尿病的血糖控制程度。

2.血糖控制水平与糖尿病慢性并发症的关系。

3.用于糖尿病病人调整用药。