干细胞有一套完善规范的体外培养方法。因其涵盖全面，又与整形外科医师密切相关，所以这里笔者会不吝笔墨加以描述。脂肪组织衍生干细胞会黏着在玻璃或者塑料的表面，只有细胞附壁后，人们才可以验证培养的成功与否。通过脂肪抽吸术或脂肪切除术取得脂肪后，将其置于无菌的冰袋中送到实验室。将提取物在无菌条件下进行均质化，然后在生物超净处置室内用磷酸盐平衡液（phosphate buffered saline，PBS）反复清洗组织，以清除残存的血迹和多余的液体，使脂肪组织尽可能地清洁干净。将清洗后的脂肪置于37℃的电磁搅拌器中搅拌。然后加入含有A 型胶原酶，少量Ⅴ型牛血清蛋白（bovine serum albumin，BSA），青霉素和链霉素的DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle Medium）培养液进行酶促降解。1小时后加入胎牛血清（bovine fetal serum，BFS）中断消化。将降解物离心，弃去浮在液面上的组织碎片。离心管底部的团块沉积，即包含有所谓的基质血管碎片（stromal vascular fraction，SVF）。再将此团块沉积转移到装满培养液的细胞培养瓶中，在37℃，5% CO2的孵箱中孵育培养。培养液应用含胎牛血清、青链霉素的DMEM。细胞会黏附于培养瓶的塑料底板。用磷酸盐缓冲液清洗细胞后，更换培养液。几天之内，细胞就会增殖并融合成片。这时，干细胞将成为未分化的间充质细胞（undifferentiated mesenchymal cells，UMCs）。当细胞生长增殖达到预期的密度时，应用胰蛋白酶-乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）处理细胞，以破坏细胞间的连接，从而获得干细胞细胞悬液，应用于临床和（或）转移培养（图2-1）。
图2-1 干细胞培养示意图
圣保罗医学院外科学部人体形态结构学科的医学研究实验室和Santa Catarina医院进行了大量的脂肪组织衍生干细胞的相关实验。在这些实验的基础上，Stocchero设计了干细胞生长曲线，该曲线应用来自身体不同部位的脂肪抽吸手术取得的脂肪，得出了如下结论：在脂肪收集当日，平均每克脂肪提取物会有5.3×103个未分化的间充质细胞产出，而这些未分化的间充质细胞以平均每天18.5%的速度递增繁殖。来自圣保罗大学药理科学院临床毒理分析部的另一项研究指出在人体的脂肪供区中，来自躯干的脂肪要比来自肢体的脂肪多产出约23.6%的细胞（表2-2）。
表2-2 脂肪的供区部位和ADSC产出的关系
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