维生素的定量测定

一、实验目的

1．学习定量维生素C的原理和方法;

2．掌握微量滴定技术。

二、实验原理

维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。它对物质代谢的调节具有重要的作用，近年来发现它还能增强机体对肿瘤的抵抗力，并对化学致癌物具有阻断作用。

维生素C是具有L－系糖构型的不饱和多羟基化合物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果(桔类、草莓、山楂、辣椒等)的含量都很丰富。

维生素C具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，维生素C易被氧化而破坏。在中性和微酸性环境中，维生素C能将染料2，6－二氯酚靛酚还原成无色的还原型的2，6－二氯酚靛酚，同时将维生素C氧化成脱氢维生素C。氧化型的2，6－二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色;当用2，6－二氯酚靛酚滴定含有维生素C的酸性溶液时，在维生素C尚未全被氧化时，滴下的2，6－二氯酚靛酚立即被还原成无色。但当溶液中的维生素C刚好全部被氧化时，滴下的2，6－二氯酚靛酚立即时溶液呈红色。所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的维生素C刚好全部被氧化，此时即为滴定终点，从滴定时2，6－二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型维生素C的含量。

其化学反应式如下:

三、实验材料、仪器和试剂

(1)材料:新鲜蔬菜或新鲜水果。

(2)仪器:研钵、天平、容量瓶(100mL)、量筒、移液管、锥形瓶(50mL)、微量滴定管、漏斗

(3)试剂:

①1%草酸溶液:1g草酸溶于100mL蒸馏水中。

②2%草酸溶液:2g草酸溶于100mL蒸馏水中

③标准维生素C溶液:准确称取20mg纯维生素C粉状结晶于1%草酸溶液中，稀释至100mL，再取其中10mL稀释至100mL，即得0．02mg/mL的维生素C标准溶液。现用现配。

④0．02%的2，6－二氯酚靛酚溶液:溶解50mg2，6－二氯酚靛酚于约200mL含有52mg的NaHCO3的热水中，冷后稀释至250mL，过滤，装于棕色瓶中，放入冰箱中保存。使用时用维生素C标准液标定其浓度。

四、实验步骤

(1)2，6－二氯酚靛酚溶液的标定:取5mL维生素C标准液及5mL1%草酸溶液于50mL的锥形瓶中，用配制好的2，6－二氯酚靛酚溶液于微量滴定管中滴定至红色出现，并保持15s不褪色，即滴定终点，此时所用染料的体积相当于0．1mg维生素C，由此可求出每毫升2，6－二氯酚靛酚溶液相当于维生素C的mg数。

(2)称取新鲜蔬菜或水果(要有大、中、小各部分的代表，洗净，除去不可食部分，切碎，混匀)约10克，于研钵中，加入等体积的2%草酸溶液研磨成浆状，得匀浆液。将匀浆液移入100mL容量瓶中，加入30%Zn(AC)2和15%K4Fe(CN)6溶液各5mL，脱色，然后用1%的草酸定容至刻度，充分摇匀，静止几分钟后过滤(弃去最初流出的几毫升溶液)。

(3)用移液管吸取滤液5mL或10mL于50mL的锥形瓶中，立即用标定过的2，6－二氯酚靛酚溶液滴定，直至溶液呈浅红色15s不褪色为止。记录所用毫升数。为了避免其他物质的干扰，滴定过程不得超过2min。

五、结果计算

式中:V——滴定样品所耗用的染料的平均毫升数;

T——1mL染料相当于维生素C的毫克数;

W——滴定时所用样品稀释液中含样品的克数。

六、注意事项

(1)整个滴定过程要迅速，防止还原型的维生素C被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应少于1mL或多于4mL，若滴定结果不在此范围，则必须增减样品量或将提取液稀释。

(2)本实验必须在酸性条件下进行，在此条件下，干扰物反应进行很慢。

(3)提取液中尚含有其他还原性的物质，均可与2，6－二氯酚靛酚反应，但反应速度均较维生素C慢。因而在滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一滴一滴地加入，并要不断地摇动锥形瓶直至呈红色15s不褪色为终点。

(4)2%草酸有抑制抗坏血酸酶的作用，而1%的草酸则无此作用。

七、思考题

(1)指出3～4种维生素C含量丰富的物质。

(2)为了准确测定维生素C的含量，实验过程中应注意哪些操作步骤?为什么?