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维生素含量的测定(紫外快速测定法)

时间:2022-02-13 理论教育 版权反馈
【摘要】:维生素C的2,6-二氯酚靛酚容量法操作步骤较繁琐,而且受其他还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法是根据维生素C可吸收紫外光以及在碱性环境中不稳定的特点,于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者吸光值之差,通过查标准曲线,即可计算样品中维生素C的含量。维生素C具有共轭结构,在稀盐酸溶液中于243nm波长处有最大吸收。

一、实验目的

1.理解紫外快速测定食品中维生素C含量的方法;

2.掌握紫外分光光度计的使用方法。

二、实验原理

维生素C的2,6-二氯酚靛酚容量法操作步骤较繁琐,而且受其他还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法是根据维生素C可吸收紫外光以及在碱性环境中不稳定的特点,于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者吸光值之差,通过查标准曲线,即可计算样品中维生素C的含量。

三、实验材料、试剂与仪器

(1)材料:市售水果、蔬菜、果汁饮料。

(2)仪器:紫外分光光度计、离心机、分析天平、容量瓶(10mL、25mL)、移液管(0.5mL、1.0mL)、吸管、研钵。

(3)试剂:

①10%盐酸:取浓盐酸133mL,加水稀释至500mL。

②1%盐酸:取浓盐酸22mL,加水稀释至100mL。

③1mol/L氢氧化钠溶液:称取40g氢氧化钠,加蒸馏水,不断搅拌至溶解,然后定容至1000mL。

四、实验步骤

1.标准曲线的制作

(1)抗坏血酸标准溶液的配制:用分析天平准确称取抗坏血酸10mg,加2mL10%盐酸,加蒸馏水定容至100mL,混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100μg/mL。

(2)取带塞刻度试管8支并编号,分别按表4-4内所规定的量加入抗坏血酸标准溶液和蒸馏水。

表4-4 抗坏血酸标准溶液紫外测定设计表

(3)吸光值的测定:以蒸馏水为空白,在243nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的吸光值,以抗坏血酸的含量(μg)为横坐标,以相应的吸光值为纵坐标作标准曲线。

2.样品的测定

(1)样品的提取:将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.0g于研钵中,加2~5mL 1%盐酸,匀浆,转移到25mL容量瓶中,稀释至刻度。若提取液澄清透明,则可直接取样测定,若有浑浊现象,可通过离心(10000×g,10min)来消除。

(2)样品的测定:取0.1~0.2mL提取液,放入盛有0.2~0.4mL10%盐酸的10mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度后摇匀,以蒸馏水为空白对照,在243nm出测定其吸光值。

(3)待测碱处理液的制备:分别吸取0.1~0.2mL提取液,2mL蒸馏水和0.6~0.8mL 1mol/L氢氧化钠溶液依次放入10mL容量瓶中,混匀,15min后加入0.6~0.8mL10%盐酸,混匀,并定容至刻度。以蒸馏水为空白对照,在243nm出测定其吸光值。

(4)由待测样品与待测碱液处理样品的吸光值之差和标准曲线,即可计算出样品维生素C的含量。

五、计算

式中:μ——从标准曲线上查得的抗坏血酸含量(μg);

V1——测吸光值时吸取样品溶液的体积(mL);

V——样品定容体积(mL);

W——称样总量(g)。

五、注意事项

维生素C具有共轭结构,在稀盐酸溶液中于243nm波长处有最大吸收。若在中性或者碱性条件中,最大吸收波长则移至至265nm。

六、思考题

(1)紫外分光光度法进行定量分析与可见光光度法进行定量分析比较有何优点?

(2)查找资料,归纳维生素C的测定方法有哪些?

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