常用工具酶

在重组DNA技术中，常需要一些工具酶进行基因操作。现将某些常用工具酶概括于表13－1。

表13－1 重组DNA技术中常用的工具酶

限制性内切核酸酶（restriction endonuclease）：可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。绝大多数限制性内切核酸酶原本存在于细菌体内，与相伴存在的甲基化酶（methylase）共同构成细菌的限制－修饰体系（restriction modification system），限制外源DNA，保护自身DNA，对细菌遗传性状的稳定遗传具有重要意义。

目前发现的限制性内切核酸酶有1 800种以上，可分为3类，其中Ⅰ和Ⅲ型由于特异性不强，故在重组DNA技术中应用价值不大。常用的限制性内切核酸酶为Ⅱ型，可以识别DNA位点的核苷酸序列呈二元旋转对称，俗称回文结构（palindrome），即配对的两条链从5′→3′的核苷酸序列是完全一致的。下述序列即为Eco RⅠ识别序列，其中箭头所指便是Eco RⅠ的切割位点：

5′－G▲A A T T C－3′

3′－C T T A A▲G－5′

限制酶的命名通常由3个斜体字母的略语来表示。第1个大写字母取自细菌属名的第1个字母，第2、3个小写字母取自微生物种名的头2个字母。遇有株名，再于其后加一大写。如果同一株名发现几种限制酶，则根据其被发现和分离的先后顺序，用罗马数字表示。例如从淀粉液化芽胞杆菌（Bacillus amyloliguefaciens）H株中发现分离出的第Ⅰ种限制酶，被称为Bam HⅠ。

限制性内切核酸酶切割DNA均产生含5′－磷酸基和3′－羟基基团的末端，其中有些酶切割后产生突黏性末端（cohesive end或sticky end）；而另一些酶切割DNA后产生平头或钝性末端（blunt end）。

有些限制性内切核酸酶虽然识别序列不完全相同，但切割DNA后产生相同类型的黏性末端，这样的酶彼此称为同尾酶（isocaudarner），所产生的黏性末端称配伍末端（compatible end），可进行相互连接；产生平端的酶切割DNA后，也可彼此连接。