胚胎生殖细胞

三、胚胎生殖细胞

畸胎癌可由生殖细胞自发产生。129小鼠睾丸畸胎癌的发生尤其普遍。随着Steel生长因子、细胞因子和白血病抑制因子（leukemia inhibitor factor，LIF）基因的克隆，生殖细胞的限制性培养获得成功，在此基础上，Matsui等在培养基中加入碱性成纤维细胞生长因子（FGF－2），几天后小鼠原始生殖细胞转化为ES类似细胞，能自我更新。这些细胞称为胚胎生殖细胞（embryonic germline cell，EG细胞）。EG细胞与囊胚来源的ES细胞无明显差别，某些细胞系能参与嵌合体小鼠的形成，并进行生殖传递。但是，在生殖细胞发育过程中，印记基因状态逐渐消除，这使发育晚期原始生殖细胞来源的EG细胞分化潜能降低。与ES细胞不同，EG细胞具有生殖细胞印记消除的特性。

几乎与人ES细胞分离、建系的同时，Gearhert等从流产胎儿的性腺生殖嵴分离出原始生殖细胞（primordial germ cell，PGC），将其培养于滋养层细胞上，在血清和LIF及FGF－2存在的条件下，7～21d后形成类似EC细胞和ES细胞的克隆，经一系列免疫组化与功能实验分析，证明获得了2种核型的人EG细胞系。

将克隆技术和ES细胞有机地结合繁衍ES细胞，可形成“治疗性克隆”。将小鼠的体细胞核移植入未受精的去核卵母细胞，这种卵母细胞经卵裂形成囊胚，从中分离得到ES细胞，这种ES细胞为体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer，SCNT）来源的ES（SCNT－ES）细胞。最近，Eggan等将小鼠终末分化的嗅觉感觉神经元的细胞核移植入去核的卵母细胞，分离得到ES细胞并植入囊胚后得到了有生殖能力的克隆鼠。同样，将人体细胞核移植入去核的卵母细胞，发育至囊胚后，也能分离得到ES细胞。2004年Hwang等将人卵丘细胞核植入去核的人卵母细胞，培养至囊胚后，分离出ES细胞，体外能分化形成拟胚体，接种至免疫缺陷小鼠后形成具三胚层分化的畸胎瘤，体外传代后，维持正常的二倍体核型，有与供体细胞一致的遗传背景。2005年，Hwang等进一步将患者的皮肤细胞核植入捐献者的去核卵母细胞中，培养于人源滋养层细胞上，分离获得了11株人ES细胞株。这些ES细胞具有自我更新和分化的能力，更为重要的是其基因型与受体细胞一致，与患者的组织相容性抗原完全兼容，可避免移植免疫排斥反应的发生，具有广阔的应用前景。各种小鼠、人胚胎多能干细胞比较见表14－1。

表14－1　各种小鼠、人胚胎多能干细胞比较

注：①SSEA：阶段特异性胚胎性抗原（stage－specific embryonic antigen）；②EB：拟胚体（embryoid bodies）；③TRA：肿瘤排斥抗原（tumor rejection antigen）；④bFGF：碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor）。