本研究结论

本研究对款冬花（Tussilago farfara L.）从本草考证、植物学研究、性状鉴别、组织显微学鉴别、规范化栽培技术、质量控制、质量评价标准和内生真菌等方面进行了研究。结合当前国外中药规范化栽培和质量控制研究的进展，运用数码显微技术、HPLC定量分析、浸出物分析、灰分分析、水分分析等现代质量控制技术来研究评价中药的质量；开展了款冬花规范化栽培的研究，对款冬的产地适宜性、产地土壤、栽培方式、密度与移栽时间、单一肥效、复合施肥、病虫害防治、收获加工等做了系统研究，提出了款冬花的规范化栽培标准。本书首次报道了款冬花的本草考证结果；首次对款冬花的叶片、叶柄、根、根茎进行了组织显微学研究，指出了款冬花与混同品的区别；提出将款冬酮作为款冬花质量控制指标，用来评价款冬花的质量，建立了款冬酮的检测方法，构建了药材款冬花的HPLC指纹图谱，制订了以款冬酮、金丝桃苷为重要指标的款冬花质量标准。综合运用多种现代先进中药质量控制技术，将化学定性、定量分析和化学指纹图谱分析结合，相互印证，较全面系统地反映了中药的内在质量，客观地对款冬花质量控制关键技术和评价指标进行了系统研究，建立了款冬花的质量控制关键技术和评价指标。

1. 款冬花本草考证

提出了宋代雍州款冬花为蜂斗菜［Petasites japonicus（Sieb. et Zucc.）F. Schmidt］；另外，当时还有款冬花花梗掺伪的情况。

2. 款冬花组织显微学研究

指出款冬花的花柱二歧分枝状，每一分枝的内表面没有沟，可以与橐吾属植物区别。花柱顶端钝圆，表皮细胞分化成短绒毛状，分布在柱头顶端的周围，下端无毛；蜂斗菜的花柱顶端钻形，渐尖，有明显区别。本书还首次报道了款冬花叶片、叶柄、根、根茎的组织显微学鉴别结果。

3. 款冬规范化栽培研究

产地适宜性研究表明，重庆巫溪款冬栽培地的水质、大气符合国家药材栽培要求，除部分地方土壤Cd超标外，其余均符合国家标准。款冬栽培方式、密度与移栽时间研究表明：种植款冬的土壤坡度以25°内为宜。款冬与玉米、马铃薯等轮作，能很好地克服款冬花的连作障碍。款冬的适宜栽培密度为4 500～5 000株/亩。款冬种植时间在农历“惊蛰”（3月上旬）以前，其产量没有明显的差异，并且比其他种植时间的产量高；种植时间在3月以后，产量明显下降，在田间观察也能看出明显差距；但在春节前栽种，其黄酮类成分含量明显高于春节以后栽培的。

肥效研究试验表明：施肥有利于提高款冬花的产量，钾肥和磷肥对提高款冬的产量更明显，氮肥和有机肥次之，在本试验土壤条件下，获得款冬高产的施肥量是氮肥（尿素，含N 46%）：6.5 kg·亩－1，过磷酸钙（含P2O5 11%）：53 kg·亩－1，氯化钾10 kg·亩－1，农家有机肥2 600 kg·亩－1。款冬施肥要薄施、勤施氮肥，多用农家肥，有机肥与无机肥混合使用，更能提高款冬花的产量。

4. 款冬花质量标准研究

本书对款冬花的水分，灰分，酸不溶性灰分，浸出物含量，As、Pb、Hg、Cd、Cu 含量，农药残留检查，微生物检查做了研究，首次报道了检查项目的研究结果。款冬花的水分测定为4.78%～7.46%，平均为5.80%，考虑到花类药材的共性，要求水分含量低于10%；款冬花的灰分为6.92%～21.96%，平均为11.00%，酸不溶灰分为3.82%～12.71%，平均为5.78%，在不同的产地其灰分与酸不溶性灰分有一定的差异，表明各产地的款冬花纯度不同，应该注意在采收加工中除杂；9批样品的浸出物含量为14.09%～21.19%，平均为16.81%，表明其内在质量有一定的相似性。款冬花的农药残留检查未检出高毒农药。款冬花的微生物检查中，9批样品细菌数均接近30 000、霉菌数接近100，分析表明：药材采收后大多不清洗，直接干燥，将土壤中的微生物直接带到药材中，造成微生物指标偏高。今后应加强对其微生物污染的控制。As、Pb、Hg、Cd、Cu的测定表明：As的含量为0.330～2.562 μg·g－1，平均为1.115 μg·g－1；Pb的含量为0.89～2.7 μg·g－1，平均为1.825 μg·g－1； Hg的含量为0.00～0.296 μg·g－1，有5个产地没有检出；Cd的含量为0.11～2.70 μg·g－1，平均为0.613 μg·g－1，有1个产地含量较高，栽培时，我们没有选择Cd超标的产地；Cu的含量为11.6～19.4 μg·g－1，平均为15.65 μg·g－1。

5. 款冬花中黄酮类成分的测定与品质评价

黄酮类成分为款冬花的有效成分和主要成分。本研究采用黄酮类成分作为质量评价指标，测定巫溪不同产地的芦丁和总黄酮。结果表明：巫溪不同产地的款冬花中芦丁含量接近，平均为22.2%，质量易于控制；总黄酮含量平均为8.45%，不同产地间差异较小。

6. 栽培方式对款冬花品质的影响研究

栽培方式对款冬花品质的影响是研究任务中比较繁重的部分，研究的内容众多，包括不同栽培时间、不同栽培方式、不同施肥种类、浓度、不同肥料的配比、不同植物调节剂的影响等；研究的时间较长，要经过2个自然收获期等，需要测试的样品量大。本研究在重庆市中药研究院同仁的协助下，经过3年的不懈努力，完成了该项研究。

对款冬花中芦丁的含量测定和测定结果的统计分析表明，影响款冬花黄酮类成分的因素是多方面的，特别是栽培的时间与芦丁含量显著相关，冬季栽培的款冬花中芦丁的平均含量为0.470%，春季栽培的款冬花中芦丁的平均含量为0.348%，冬栽款冬比春栽款冬的芦丁含量要高30%。我们认为：播种时间对款冬花品质有显著的影响，款冬以冬栽为宜。

较高水平钾肥能显著提高款冬花的品质，提高款冬花的芦丁含量；多施有机肥也能提高款冬花的芦丁含量。栽培时应注意钾肥与有机肥的施用，以提高款冬花的产量与质量。

款冬栽培密度、行栽、窝栽的栽培试验表明，芦丁含量与这些因素无显著相关性。对不同肥料试验的款冬花中芦丁含量测定和统计分析表明，不同肥料品种、不同肥料浓度、不同肥料的交叉试验，不同激素使用对款冬花的芦丁含量均无显著相关性，表现出复杂的关系，说明款冬花的芦丁含量与温度、大气、水分、土壤等自然因素关系密切，与肥料试验的影响关系不大。

7. 款冬酮检测方法的建立与含量测定

款冬酮为款冬花特有的有效成分，目前还未见有其他植物含有款冬酮的报道。以款冬酮作为款冬花质量评价的指标，可以准确区分款冬花和其他药材，专属性强，对于款冬花的质量控制有极其重要的意义。本书首次提出将款冬酮作为款冬花质量控制指标，用来评价款冬花的质量，建立了款冬酮的检测方法，测定个了全国10个主产地、5个不同采收时期以及蜜制款冬花的款冬酮含量，初步建立了款冬花指纹图谱，制订了以款冬酮为重要指标的款冬花质量标准。

本研究采用了超声提取、加热回流提取等不同的提取方法，采用甲醇、乙醇、乙酸乙酯等不同的溶剂和不同的浓度，对款冬酮的提取方法做了研究，最后采用石油醚脱脂，甲醇提取的方法。HPLC检测表明，此方法提取完全，杂质含量少，简便实用，可作为款冬酮提取的最佳手段。

款冬酮测定的方法学研究表明：用安捷伦 C18 柱，150 mm×4.6 mm× 0.5 μm；流动相：甲醇-水（80∶20）；流速：0.8 mL·min－1；波长：220 nm；柱温：20 °C，可以将款冬酮完全分离。

测定结果表明：巫溪县双阳大坪村所产款冬花中款冬酮含量最高，为0.057 7%，陕西蒲城、陕西彬县的野生款冬花含量最低，为0.012 2%，款冬花中平均款冬酮含量为0.030 2%。栽培款冬花的含量明显高于野生款冬花，有显著差异。

本研究为中药材的质量控制关键技术和评价标准研究提供了方法学研究基础，同时为建立款冬花的质量控制关键技术和评价标准提供科学的依据。

8. 金丝桃苷的含量测定

不同产地的款冬花中金丝桃苷含量差异较大，平均为0.026%。对金丝桃苷的测定有利于款冬花的质量控制，特别适合于不同产地、不同栽培方式的款冬花的鉴定。

9. 款冬花内生菌的分离及抗菌活性研究

从新鲜款冬的根、茎、叶各部分组织中共分离得到内生菌13株，其中内生细菌6株、内生真菌7株。分离的内生真菌TE-R7初步鉴定为镰刀菌属（Fusarium）真菌，对枯草芽孢杆菌、肺炎氏链球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢杆菌、白色念珠球菌等有明显的抑菌作用，抑菌Φ≥15 mm。对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、铜绿假单孢杆菌、白色念珠球菌等的最低抑菌浓度MIC小于5 mg·mL－1，表明其具有很强的抗菌活性。款冬内生菌对一些作物的病原菌也有明显的抑制作用，今后可以作为生物农药来研究。

综上所述：经过3年多的研究，本书对款冬花的本草学研究提出了新的见解，完善了款冬花的本草考证内容。在款冬的组织显微学研究中，强调款冬花花柱的鉴别特征，指出了款冬花与其他易混药材的鉴别特征；首次完成了叶、根、根茎的显微鉴别，拓展了款冬花的组织显微学研究范围。在款冬栽培研究中，本书报道了款冬花栽培方式和肥效研究试验结果，报道了栽培方式和肥效试验对款冬花所含黄酮类成分的影响，首次提出了款冬花的GAP种植标准和药材质量标准，为款冬花的规范化栽培和质量检测提供借鉴方法。

为了制订科学、专属的药材质量标准，本书完成了款冬花检查项目的研究，弥补了《中国药典》（2005年版）对款冬花检查项目的空白；完成了款冬花中特有的有效成分款冬酮的含量测定，初次测定了不同产地款冬花中款冬酮的含量，并以此作为款冬花质量评价的重要指标。另外，本研究还从款冬花中分离出具有抗菌作用的镰刀菌属（Fusarium）内生真菌，为以后进一步研究奠定了基础。