鱼用疫苗的研究趋势及问题探讨

六、鱼用疫苗的研究趋势及问题探讨

1．研制方法和趋势 目前，我国已使用的疫苗有两种，即草鱼出血病灭活疫苗和土法疫苗。

（1）草鱼出血病灭活疫苗

作用：主要预防草鱼出血病。

制备方法：取具有典型症状的病鱼，先用碘酒在鱼腹部表皮消毒，再剖开鱼腹，取出肝、脾、肾等组织，并称其量，剪碎，在研钵中磨成糊，加5～10倍生理盐水（0．65%氯化钠），使成10^－1或10－2浓度，在3000转／分的转速下离心30分钟。用1～2层纱布过滤，滤液即为原毒疫苗。

把上述制备的原毒疫苗置入小锅内，水浴加热2小时，水温控制在60～65℃，进行消毒。把消过毒的原毒疫苗加放到福尔马林液中，使其最终浓度为0．1%（即100毫升疫苗加1毫升福尔马林），并且每毫升清液加青霉素800单位、链霉素800微克。搅匀后，采用石蜡封口，放入冰箱保存备用。通常2～3个月内有效。如果没有冰箱设备，放在阴凉处保存1个半月也有效。

接种方法：把制备好的类毒素，注射到健康的鱼体内，使健康的鱼组织内产生抗体，而获得一定的免疫力。具体接种方法如下：首先准备剪刀、镊子、天平、研钵、小锅子、温度计、玻璃瓶、注射器、小量筒、漏斗、纱布、药棉、生理盐水、福尔马林、碘酒、冰块、冰箱等。再准确计算注射药物剂量，体重250克以下的鱼，每尾注射0．1～0．2毫升；体重250克，每尾注射0．2～0．3毫升；体重500克，每尾注射0．3毫升；体重500克以上，每尾注射0．5毫升。而后正确选择注射部位进行注射接种。使用套用胶管的25号针头，从胸鳍基部、腹鳍基部、背鳍基部的肌肉注射，注射深度以不伤鱼体内脏为准（0．2～0．3厘米深度），注射倾斜度一般为30°～45°。

为了方便注射时的操作，可采用敌百虫浸洗鱼体，使鱼体麻醉，即用1．5%的敌百虫浸洗5分钟。

免疫效果：该种免疫苗是由中国科学院水产生物研究所试验成功的。在一冬龄草鱼体上注射疫苗后，能抵抗住3～7月份的发病高峰期，成活率达93%以上，免疫期不少于14个月；草鱼免疫后，用原毒攻击，成活率可达90%。目前此法已在国内部分地区广泛应用。

（2）土法疫苗（又叫脏器苗）

作用：主要预防草鱼肠炎病、烂鳃病、赤皮病及出血病。

制备方法：取出具有肠炎、烂鳃、赤皮、出血病的草鱼，先用碘酒或75%酒精消毒鱼腹表面，用已消毒的剪刀从肛门向头部剪开，除去一边鱼腹；再用已消毒的镊子取出肝、脾、肾及病变的肌肉，并加5倍的生理盐水，即1克组织匀浆加入5毫升（含氯化钠0．8%）生理盐水；并用两层医用纱布过滤，弃去滤渣，离心沉淀（3500转／分钟）30分钟后，取上清液置入瓶中，放入60～65℃水浴锅中灭活2小时，或放入32℃恒温水浴箱灭活，随后加入福尔马林液，使最终浓度为0．5%，再用石蜡封瓶口后，放入冰箱保存，待用。

安全试用：取疫苗，每尾健康草鱼注射0．1～0．2毫升，放在28～29℃的水缸中饲养观察15天，若无此类疾病出现，说明疫苗是安全可靠的。但一定要做对比试验。

接种方法：在投放鱼种季节，可取上述制备的疫苗，用鱼用生理盐水稀释1倍，从健康的草鱼背鳍部、胸鳍基部或背部肌肉注射入体。注射深度0．2～0．5厘米，也可根据鱼体的大小而定，以不伤及内脏为准。一般体重为250克的草鱼注射0．1毫升，注射后即可放塘饲养。为便于操作，在注射前可用2%～2．5%的晶体敌百虫浸洗3～5分钟，使鱼处于麻醉状态，并可杀灭部分寄生虫。

免疫效果：此免疫法是广东省水产研究所等单位试验成功的，自1969年起，在广东和全国有关地区应用。实践证明，用土免疫法预防鱼病，方法简单易行，容易推广。不少地区反应，到目前为止，此种方法不仅是对付出血病最好的预防方法，而且还可预防草鱼肠炎、烂鳃及赤皮病。湖北省黄冈县里湖渔场，放养免疫鱼种5批，成活率分别为97．72%、97．84%、93．16%、97．13%和96．76%，而对照池放未免疫鱼种的成活率为73．8%。该场还在网箱内做对比试验，免疫过的养鱼网箱放入3000尾，收获2725尾，成活率为91．66%；未免疫过的网箱放入3000尾，收获只有850尾，成活率仅有28．33%。土法制备草鱼疫苗的方法简单，投资小（3000～4000元），设备简易。生产一瓶（500毫升）成本只需6～10元，可注射草鱼种4000～4500尾，平均每尾只花0．15分钱。

2．存在问题与探讨 目前，鱼类免疫已运用于草鱼出血病、烂鳃病、肠炎病、赤皮病等的预防，并取得了较好的成效。但这项工作在实际生产中还存在不少困难和问题，阻碍了鱼类免疫工作的顺利发展。

（1）疫苗单调。目前我国应用的主要是草鱼“四种病”，显得太单调。鱼类发病较多，如鲤鱼疖疮病（出血病）、鲫鱼出血病、鲢鱼出血病，甚至鳙鱼也有出血病，一旦能解决了这些较难治的疾病，那就是给广大生产者帮了一个大忙。

（2）疫苗的来源。我国所用的鱼类疫苗，多数是采用土法制成的，很不符合规格，药液中沉淀大量的凝絮物和杂物，免疫的效果往往很不理想，甚至杂质还会引起鱼类患上炎症而死亡。最根本的原因是鱼类的疫苗还没有专业厂家生产。

（3）免疫途径。目前，我国所采用的免疫途径主要是注射法。这种方法，操作起来特别不方便，并要消耗大量的时间。有的注射技术缺乏，往往会造成鱼类成批死亡，这是一个亟待解决的大问题。